奶牛乳腺炎三聯(lián)苗田間試驗及牛源無乳鏈球菌CAMP因子的克隆表達.pdf

1、用篩選到的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、無乳鏈球菌疫苗株甲醛滅活后，選用合適的佐劑制備乳腺炎三聯(lián)苗，經(jīng)過理化性質(zhì)鑒定、無菌檢驗和安全檢驗。對小鼠免疫三次后采血，用全菌包被ELISA試驗檢測鼠血清抗體，結果表明采用油佐劑制成的奶牛乳腺炎三聯(lián)苗物理性狀穩(wěn)定能有效激發(fā)小鼠產(chǎn)生抗金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、無乳鏈球菌的血清抗體。 為評價奶牛乳腺炎三聯(lián)油乳劑滅活疫苗防制奶牛乳腺炎的效果，我們進行了疫苗接種田間試驗。為評價疫苗免疫效果建立了金黃色

2、葡萄球菌、大腸桿菌、無乳鏈球菌菌體包被酶標板檢測血清抗體效價的間接ELISA檢測方法。在對試驗奶牛三次免疫后檢測牛血清抗體效價。結果發(fā)現(xiàn)免疫組血清抗體效價與對照組相比有明顯提高。免疫乳清體外抑菌試驗的結果表明乳清中較高的特異性抗體確實能抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、無乳鏈球菌的生長。 提取能產(chǎn)生CAMP反應的牛源無乳鏈球菌山東分離株的基因組DNA，PCR擴增CAMP因子基因，重組到pMD18-T載體中。測序結果表明，擴增片斷含有

3、768bp的開放讀碼框(Open reading frame，ORF)，可編碼含255個氨基酸的成熟蛋白，與已報道的無乳鏈球菌CAMP因子蛋白的氨基酸組成相比，第8位Tyr→Cys，第95位Pro→Ser，第126位Thr→Ala的3個氨基酸發(fā)生了點突變，同源性為98.4％。成功構建原核表達載體pET32a+/cfb，SDS-PAGE分析蛋白質(zhì)表達水平，IPTG誘導后表達的融合蛋白分子量為48kD，表達量占菌體總蛋白的52.7％。這為進