利用小孢子培養(yǎng)和誘變技術(shù)改良甘藍(lán)型油菜CMS恢復(fù)系.pdf

1、該研究以雙低甘藍(lán)型油菜波里馬細(xì)胞質(zhì)雄性不育(CMS)恢復(fù)系1815、7812和輪31為實(shí)驗(yàn)材料,通過小孢子培養(yǎng)技術(shù)、單倍體離體輻射誘變、種子輻射誘變以及單倍體幼胚化學(xué)誘變等技術(shù),結(jié)合AFLP分子標(biāo)記技術(shù)和脂肪酸成分分析,初步探索了油菜恢復(fù)系改良的新途徑.主要結(jié)果如下:1 小孢子培養(yǎng)及后代的脂肪酸成分分析和抗病性鑒定 1.1 建立了甘藍(lán)型油菜雙低恢復(fù)系7812和1815的DH(Doubled Haploid)群體,其群體大小分別為68個和

2、57個株系.1.2 DH群體的脂肪酸成分分析,結(jié)果表明:兩群體中各脂肪酸含量變異系數(shù)均較小;在兩個群體中各找到了3個油酸+亞油酸含量大于85﹪的DH株系.1.3 終花期核盤菌牙簽接種DH群體鑒定菌核病抗性,結(jié)果顯示:兩群體抗病性均較差,病斑擴(kuò)展速度快,接種3d-7d間病斑長度平均日增長率超過2cm/d;與對照相比,1815中個別株系的抗病性有顯著提高.1.4 DH群體AFLP分析表明兩個DH群體內(nèi)的基因型差異較小.1.5 該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明

3、:小孢子培養(yǎng)可在保持原有品系的某些優(yōu)良性狀的基礎(chǔ)上使基因型迅速純合,并在后代中可篩選到脂肪酸成分和抗病性得到改良的株系.2 利用誘變技術(shù)改良油菜CMS恢復(fù)系 2.1 單倍體試管苗離體器官葉柄、根和幼莖中,以幼莖在附加有0.5m/L 2,4-D和2mg/L 6-BA的MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織的效果好;Co<'60>-γ處理愈傷組織的輻射誘變劑量在0.774C/Kg—1.032C/Kg較適宜;對愈傷組織誘變后獲得的39株再生苗進(jìn)行AFLP分

4、析發(fā)現(xiàn)各變異株遺傳背景高度一致,其中有8對引物在10個單株中擴(kuò)增出43條差異帶.2.2 利用25.8C/Kg的Co<'60>-γ射線對輪31的5個品系谷2-1、谷2-2、谷2-3、谷2-4和谷2-5的種子進(jìn)行輻射誘變,結(jié)果表明:谷2-3對輻射最敏感,谷2-1抗輻射性最強(qiáng);輻射處理對供試油菜的種子發(fā)芽率影響較小;谷2-1和谷2-2的M<,3>種子脂肪酸成分分析表明:輻射誘變處理對芥酸含量的影響較大,而對油酸、亞油酸和亞麻酸含量的影響較小.

5、2.3 EMS(甲基磺酸乙酯)對小孢子來源的單倍體幼胚進(jìn)行誘變處理的最佳濃度為0.1﹪-0.2﹪,濃度為0.1﹪時最佳處理時間為90min-120min;單倍體植株加倍處理以移栽前100mg/L秋水仙堿,蔗糖2﹪的水溶液浸根處理5d效果較好,且方便經(jīng)濟(jì);EMS誘變處理對油酸和亞油酸含量的影響較大,其中找到了油酸含量高達(dá)68.62﹪的材料.2.4 三種誘變方法比較表明:種子誘變前期工作簡單,但后期篩選麻煩、工作量大;單倍體離體誘變能提高變