油菜(Brassica napus L)小孢子培養(yǎng)技術(shù)體系的改良和DH群體的構(gòu)建.pdf

1、自從Lichter1982年對(duì)甘藍(lán)型油菜游離小孢子培養(yǎng)獲得成功，該技術(shù)作為一種高效育種方法，受到了油萊育種家的普遍關(guān)注。在國內(nèi)，由于油菜栽培在自然條件的大田中，受環(huán)境多變因素影響較大，影響了胚狀體的誘導(dǎo)，限制了其在育種上的應(yīng)用。
　　 本研究以大田植株為供體材料，對(duì)甘藍(lán)型油菜離體小孢子培養(yǎng)條件進(jìn)行研究，重點(diǎn)探尋南京生態(tài)條件下甘藍(lán)型油菜小孢子培養(yǎng)過程中有利于提高胚產(chǎn)量和獲得加倍二倍體的幾個(gè)關(guān)鍵因素。主要研究結(jié)果如下：
　　

2、 1以寧雜11號(hào)，RV7和中雙9號(hào)為試材，通過對(duì)小孢子胚胎發(fā)育細(xì)胞學(xué)觀察，認(rèn)為2.8～3.5mm范圍內(nèi)的花蕾最適合小孢子培養(yǎng)。
　　 2應(yīng)用低含油量甘藍(lán)型油菜品系“1064”與高含油量品系“H105”雜交Fi植株花蕾進(jìn)行小孢子培養(yǎng)，研究了不同生態(tài)區(qū)域（南京和西寧）的田間氣候?qū)π℃咦赢a(chǎn)胚率的影響。對(duì)長度在0.4-0.6cm,0.6-0.8cm以及0.8cm以上的胚分別培養(yǎng)，觀察它們的出苗率差異，并比較了秋水仙堿處理離體小孢子、浸根

3、和滴芽3種染色體加倍方法的加倍效率。結(jié)果表明，種植在西寧的材料小孢子產(chǎn)胚率較高，為8.6枚/皿；0.6-0.8cm大的胚轉(zhuǎn)接到B5固體培養(yǎng)基，其出苗率高達(dá)48.53％;3種加倍處理方法中以50mg/L秋水仙堿溶液處理離體小孢子48h染色體加倍效率最高，達(dá)到46.23％。本研究構(gòu)建了含有94個(gè)株系的DH群體
　　 3基因型是影響單倍體培養(yǎng)的主要因素，是決定胚狀體形成的先決條件。以寧油14號(hào)，寧雜11號(hào)，AR6R, Jophia，

4、BE408803， Westar, RV7和中雙9號(hào)為研究對(duì)象，結(jié)果顯示：供試的8個(gè)基因型材料有7個(gè)獲得了胚狀體，并且不同材料出胚率差異明顯，最高達(dá)14.73胚/蕾，最低只有0.46胚/蕾。
　　 4大多數(shù)材料在初花期，取主枝花蕾有利于胚胎的發(fā)生，也有個(gè)別材料適合盛花期進(jìn)行小孢子培養(yǎng)。
　　 5寧油14號(hào)，寧雜11號(hào)等7個(gè)供試材料分別在3個(gè)培養(yǎng)密度0.5蕾/ml、1.0蕾/ml、2.0蕾/ml下進(jìn)行出胚數(shù)研究，結(jié)果顯示1

5、蕾/ml的培養(yǎng)密度下平均出胚數(shù)最高，最適合胚胎的誘導(dǎo)和發(fā)育，材料BE408803出胚率達(dá)到40.8個(gè)/蕾。
　　 6以寧雜11號(hào)，RV7， BE408803和中雙9號(hào)為試驗(yàn)材料，分析了換液處理對(duì)甘藍(lán)油菜小孢子的胚胎誘導(dǎo)影響，結(jié)果表明：小孢子在NLN13中培養(yǎng)2d后更換一次培養(yǎng)液能夠明顯提高胚產(chǎn)量。
　　 7對(duì)DH群體含油量進(jìn)行分析，由DH群體含油量分布圖推測(cè)高油親本含油量存在主基因控制，同時(shí)存在一些微效基因，并獲得49.