甘藍(lán)型油菜（Brassica napus）WRI1同源基因克隆及功能初步分析.pdf_第1頁(yè)
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1、本研究利用PCR技術(shù)的cDNA文庫(kù)篩選方法，從甘藍(lán)型油菜(Brassicanapus cv Tapidor)豆莢cDNA文庫(kù)中分離得到5個(gè)與擬南芥WRH同源的候選基因，分別命名為BnMRIla、BnWRIlb、 BnWRIlc、 BnWRIld、BnWRIle。其中BnWRIlb與GenBank中BnWRIl(GeanBank DQ370141)相同。這5個(gè)候選基因核苷酸序列及預(yù)測(cè)的氨基酸序列與擬南芥WMIl均具有較高的同源性；5個(gè)候選

2、基因預(yù)測(cè)的氨基酸序列均具有AP2/EREBP家族轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特征：含有兩個(gè)AP2/EREBP結(jié)構(gòu)域，且N-端均富含S/T，C-端均含有一個(gè)酸性結(jié)構(gòu)區(qū)?？梢酝茰y(cè)：5個(gè)基因?yàn)楦仕{(lán)型油菜WMl基因家族的不同成員。把5個(gè)基因分別克隆到pGBDT7載體中，利用酵母雙雜交系統(tǒng)證明5個(gè)候選基因均具有轉(zhuǎn)錄激活活性，說(shuō)明5個(gè)候選基因均可能編碼AP2/EREBP家族轉(zhuǎn)錄因子；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)BnWMIla的C-端酸性結(jié)構(gòu)區(qū)對(duì)轉(zhuǎn)錄激活活性是必須的。利用半定量

3、RT-PCR法分析油菜BnWRIla基因在不同組織中的表達(dá)特性，發(fā)現(xiàn)BnWMIla在花和豆莢中的表達(dá)量較高，而在根、莖、葉等組織中表達(dá)量較低，推測(cè)BnWRIla基因可能在油菜開(kāi)花和結(jié)實(shí)過(guò)程中發(fā)揮作用。在擬南芥種子發(fā)育過(guò)程中，WRIl基因在控制從碳水化合物到油的積累過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，WMIl基因在CaMV 35S啟動(dòng)子控制下的異位過(guò)表達(dá)，不僅可以增加種子中的含油量，而且可以增加幼苗中的含油量。為了驗(yàn)證甘藍(lán)型油菜BnWRIls是否對(duì)甘藍(lán)型

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