13145.紅色糖多孢菌基因敲除和sace_0069基因功能研究

1、UDC：華東理工大學學位論文紅色糖多孢菌基因敲除和SACE_0069基因功能研究古明珠指導教師姓名：葉邦策教授華東理工大學申請學位級別：碩士專業(yè)名稱：生物化工論文定稿日期：20130424論文答辯日期：20130530學位授予單位：華東理工大學學位授予日期：翻僻5籍2一j藉答辯委員會主席：鮑杰教授評閱人：史賢明教授周英副教授華東理工大學碩士學位論文第1頁紅色糖多孢菌基因敲除和SACE0069基因功能研究摘要紅色糖多孢菌的次級代謝產(chǎn)物紅霉

2、素及其衍生物應用廣泛，為提高紅霉素產(chǎn)量和揭示相關代謝調控機制，越來越多的基因工程研究和改造技術應用于紅色糖多孢菌。本論文研究了電擊轉化、結合轉移、PEG介導的原生質體轉化三種基因敲除方法，利用PEG介導的原生質體法成功實現(xiàn)了紅色糖多孢菌中基因的敲除，獲得了SACE0069，SACE0500，SACE1897，SACE3795四個基因敲除菌。SACE0069為鏈霉菌中負調控基因nsdA在紅色糖多孢菌中的高度同源基因，其敲除菌與模式菌表型差

3、異實驗表明該基因在紅色糖多孢菌孢子分化和紅霉素合成方面有負調控作用。另外，轉錄組實驗數(shù)據(jù)顯示SACE0069敲除菌中表達差異倍數(shù)在兩倍以上的基因有500多個，表達差異倍數(shù)在三倍以上的基因有120多個，這些基因涉及到能量代謝、糖代謝、氨基酸代謝等多條代謝途徑。根據(jù)轉錄組實驗數(shù)據(jù)進一步設計了凝膠阻滯實驗，并得到了兩個疑似靶基因SACE6415和SACE6240。本課題對SACE0069基因功能的研究，一定程度上為紅霉素高產(chǎn)菌株的篩選提供了新