豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因的克隆、多態(tài)及其與肉質(zhì)性狀和背膘厚間的關(guān)系研究.pdf

1、鈣蛋白酶系統(tǒng)在細(xì)胞內(nèi)普遍存在,參與機(jī)體生長與代謝過程,尤其在肌原纖維更新和宰后肉嫩化中扮演重要角色.鈣蛋白酶抑制蛋白(Calpastatin,CAST)是一種內(nèi)源性的、需Ca<'2+>激活的鈣蛋白酶抑制劑,可抑制肌肉內(nèi)蛋白質(zhì)降解,降低肌細(xì)胞生長速度;屠宰后可抑制鈣蛋白酶的活性,降低蛋白質(zhì)水解.研究表明,豬CAST基因的產(chǎn)物參與肌肉生長過程中蛋白質(zhì)的更新;在其它肉畜中則已發(fā)現(xiàn),CAST基因的產(chǎn)物顯著影響肉的嫩度.該研究利用PCR-SSCP

2、、PCR-RFLP和直接測序方法對PIC商品豬和梅山豬、蘇太豬、杜×長×大、長白×蘇太、大白×蘇太等分別進(jìn)行CAST基因的多態(tài)性掃描和遺傳效應(yīng)研究,并對豬CAST基因部分序列進(jìn)行了克隆及結(jié)構(gòu)分析.具體工作及其結(jié)果如下:(1)豬CAST基因部分序列的克隆及結(jié)構(gòu)分析:首次克隆了豬CAST基因的部分編碼序列,并通過序列拼接獲得了豬2型CAST基因的cDNA序列(Genbank acc.NO.AY555195).通過對豬2型CAST基因進(jìn)行結(jié)構(gòu)

3、預(yù)測及結(jié)構(gòu)域分析,為進(jìn)一步研究鈣蛋白酶抑制蛋白在豬體內(nèi)的功能打下了良好的基礎(chǔ).(2)豬CAST基因的多態(tài)性分析:分別利用PCR-SSCP、PCR-RFLP和直接測序方法來尋找多態(tài)位點.(3)豬CAST基因的基因型及基因頻率分布:X<'2>獨立性檢驗統(tǒng)計結(jié)果表明,各基因型頻率在不同豬群體間均差異極顯著(P<0.01).在各多態(tài)位點上,杜×長×大及蘇太豬個體均表現(xiàn)為三種基因型,梅山豬個體表現(xiàn)為一種或兩種基因型,大白×蘇太和長白×蘇太個體表現(xiàn)

4、為兩種或三種基因型.這可能是由于長期的自然選擇和人工選擇所造成的結(jié)果.(4)豬CAST基因SNPs與肉質(zhì)性狀和背膘厚的相關(guān)分析:對PIC125頭雜交豬全部進(jìn)行屠宰測定,采用PCR-RFLP方法和直接測序的方法找到CAST基因的多態(tài)性,并分析其在不同的基因型、飼料及基因型與飼料的互作效應(yīng)對肉質(zhì)性狀和背膘厚這一重要的屠體性狀的影響.結(jié)果如下:①不同的飼料對肌內(nèi)脂肪、肌內(nèi)蛋白、肉色有顯著影響;②基因型效應(yīng)對肌內(nèi)脂肪含量和背膘厚具有顯著影響;③