蓖麻蠶體液胰凝乳蛋白酶抑制劑調(diào)查及其基因克隆.pdf

1、蛋白酶抑制劑在A然界中無處不在,它們以多種形式存在于動物、植物甚至微生物的各種組織中,主要的生理功能是防止不必要的蛋白水解.胰凝乳蛋白酶抑制劑(CI)是絲氨酸蛋白酶抑制劑的一種,對維持昆蟲正常的生長發(fā)育起著重要的作用.同時(shí)也是昆蟲體內(nèi)非細(xì)胞免疫系統(tǒng)的重要組成部分.蓖麻蠶是我國三大產(chǎn)絲昆蟲之一,對其體內(nèi)胰凝乳蛋白酶抑制劑的研究不但有助于蓖麻蠶本身生理、生化的研究,也必將對其他野生鱗翅目昆蟲生理、生化的研究產(chǎn)生重要意義. 本研究通過

2、非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和活性染色技術(shù),對20個(gè)蓖麻蠶品種血液CI的種類和同一品種不同發(fā)育時(shí)期CI活性變化進(jìn)行了調(diào)查.由于各種CI等電點(diǎn)不同,引起遷移速度有快慢,在堿性電泳中檢測到7種CI,定名為E-C11、E-C12、E-C13、E-C14、E-C15、E-C16、E-C17,等電點(diǎn)依次減小:在酸性電泳中檢測到2種CI,定名為E-CIa、E-CIb.其中E-C11、E-C12、E-C13、E-C16、E-C17、E-CIa、E-Clb

3、為供試品種所共有,表明它們是蓖麻蠶生長發(fā)育所必需的.對同一蓖麻蠶品系不同發(fā)育時(shí)期血液CI的調(diào)查顯示,隨5齡期發(fā)育,CI的活性有逐漸遞增的趨勢. 根據(jù)家蠶中編碼成熟CI-b1的cDNA序列設(shè)計(jì)引物,利用RT-PCR技術(shù),對8個(gè)蓖麻蠶品種的CI基因進(jìn)行了克隆.結(jié)果在8個(gè)品種中克隆的基因相同,基因序列長為189bp,預(yù)測編碼62個(gè)氨基酸殘基的成熟蛋白,對蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測表明該蛋白有一個(gè)典型的Kunitz結(jié)構(gòu)域.核苷酸序列同源性比較顯示,克