20601.應用噬菌體展示肽庫篩選和鑒定α(2,3)唾液酸氨基乳糖模擬肽

1、碩士學位論文題目應用噬菌體展示肽庫篩選和鑒定應用噬菌體展示肽庫篩選和鑒定α(23)唾液酸氨基唾液酸氨基乳糖模擬肽乳糖模擬肽英文題目英文題目ScreeningIdentificationofa3’–SialyllactosamineGlycomimeticPeptidefromaPhageDisplayPeptideLibrary姓名馬志奎學號10920017所在學院醫(yī)學院導師姓名MelittaSchachner專業(yè)生物化學與分子生物學入

2、學日期2009年9月答辯日期2012年5月2009級汕頭大學醫(yī)學院碩士研究生學位論文馬志奎I中文摘要目的α(23)唾液酸多糖在神經系統中發(fā)揮著重要作用，參與調節(jié)諸如細胞遷移，軸突生長和收縮，突觸的形成和穩(wěn)定以及突觸的功能等過程。其中3’–SLN存在于眾多α(23)唾液酸多糖末端，是多糖發(fā)揮作用的關鍵位點，同時也可能成為神經系統疾病的治療靶點，但由于3’–SLN在神經系統中的研究和報道較少，3’–SLN的提純和合成成本高昂，不利于進一步的

3、研究和應用，因此，本課題旨在應用朝鮮槐凝集素MAA對3’–SLN糖的特異識別作用和噬菌體多肽展示技術篩選出3’–SLN的糖模擬肽，在結構和功能上替代3’–SLN，以利于進一步研究3’–SLN的功能和新的治療藥物及靶點。方法1.噬菌體展示肽庫淘選根據肽庫說明書，進行四輪淘選，第一輪主要過程：(1)靶分子包被：100μgml朝鮮槐凝集素MAA溶于pH8.6的NaHCO3溶液，包被于96孔板中，4℃過夜。(2)噬菌體結合及洗脫：倒掉包被液并將

4、板孔拍甩干凈，加滿封阻液，4℃作用2h。0.1%TBST緩沖液洗6次，去除封阻液，加入100μl，0.1%TBST緩沖液稀釋的41010噬菌體（即10μl原始文庫），室溫孵育60min，去除孵育液，0.1%TBST緩沖液洗板10次。加入100μlTBS稀釋的1mM的3’–SL溶液，室溫搖動60min，洗脫液轉入微量離心管，測定滴度。(3)噬菌體擴增：將ER2738單克隆菌過夜培養(yǎng)物1:100稀釋于20mlLB培養(yǎng)液中，加入上述洗脫物，3