組成型表達(dá)線粒體小分子熱激蛋白基因?qū)Ψ芽估湫缘挠绊?pdf

1、對(duì)于許多植物來(lái)說(shuō),線粒體在抵抗逆境脅迫中起重要作用.已經(jīng)報(bào)道,線粒體是受低溫影響的主要細(xì)胞器<'[22]>.在線粒體中,通過(guò)氧化磷酸化作用進(jìn)行能量轉(zhuǎn)換,為細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)提供能量,線粒體是細(xì)胞的能量代謝中心,呼吸過(guò)程中產(chǎn)生的活性氧,能調(diào)節(jié)氧化還原電勢(shì)、細(xì)胞氧化還原信號(hào)及基因表達(dá).線粒體小分子熱激蛋白是線粒體的主要熱脅迫產(chǎn)物,細(xì)胞外的研究表明線粒體sHSP具有分子伴侶的作用,且在煙草中組成型表達(dá)番茄線粒體sHSP能提高煙草的抗熱性.此外,番

2、茄線粒體sHSP能夠被冷誘導(dǎo),已有實(shí)驗(yàn)證明葉綠體sHSP、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)sHSP、細(xì)胞質(zhì)sHSP與細(xì)胞的耐冷性有關(guān),而線粒體sHSP是否也與植物的耐冷性有關(guān)還不清楚.該實(shí)驗(yàn)利用利用基因工程方法,將線粒體sHSP基因定向克隆于帶有組成性表達(dá)啟動(dòng)子CaMV35S的植物表達(dá)載體pROK H中,凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404,利用葉圓盤(pán)法對(duì)番茄進(jìn)行Ti質(zhì)粒介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化.提取轉(zhuǎn)基因番茄基因組DNA,以NPTⅡ基因的一對(duì)引物對(duì)其進(jìn)行PCR分析,初步表明線