BADH基因在轉(zhuǎn)基因番茄中的組成型和鹽誘導(dǎo)表達(dá).pdf

1、在植物抗逆基因工程中，許多基因包括轉(zhuǎn)錄因子都由組成型啟動(dòng)子或脅迫誘導(dǎo)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)。組成型啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)外源基因在轉(zhuǎn)基因植株中組成表達(dá)，會(huì)引起轉(zhuǎn)基因植株生長(zhǎng)抑制和產(chǎn)量降低。誘導(dǎo)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)外源基因在轉(zhuǎn)基因植株中誘導(dǎo)表達(dá)，不影響植株生長(zhǎng)和產(chǎn)量。
　　 甜菜堿醛脫氫酶(BADH)是植物體內(nèi)合成甜菜堿這一過(guò)程中的關(guān)鍵酶。甜菜堿是一種非毒性的小分子滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，在植物耐鹽中起著非常重要的作用。BADH基因受鹽誘導(dǎo)表達(dá)，它的啟動(dòng)子(P5：-300～

2、+62bp)是鹽誘導(dǎo)啟動(dòng)子。
　　 本研究將分別由P5啟動(dòng)子和CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的遼寧堿蓬BADH基因，通過(guò)葉盤轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)入Micro-Tom中。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR轉(zhuǎn)基因Micro-Tom中外源BADH基因的拷貝數(shù)，選擇單拷貝的轉(zhuǎn)基因植株，并對(duì)其BADH基因的表達(dá)進(jìn)行分析，比較兩種轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽性及其生長(zhǎng)狀態(tài)，主要結(jié)果如下：
　　 1.采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法將P5：BADH和CaMV35S：BADH轉(zhuǎn)入Micr

3、o-Tom。共采用約400粒種子，獲得約90株再生植株。
　　 2.挑選16株P(guān)CR檢測(cè)為陽(yáng)性的轉(zhuǎn)基因植株，用real time PCR鑒定出3株單拷貝P5：BADH轉(zhuǎn)基因植株和1株單拷貝CaMV35S：BADH轉(zhuǎn)基因植株。
　　 3.0 mM，100 mM和200 mM NaCl處理轉(zhuǎn)基因及野生Micro-Tom24 h后，RealtimePCR檢測(cè)表明，P5啟動(dòng)子誘導(dǎo)BADH基因的mRNA升高2.3倍在100mM N

4、aCl處理下，在200 mM NaCI條件下增加3倍。轉(zhuǎn)P5：BADH Micro-Tom的BADH表達(dá)量明顯高于轉(zhuǎn)CaMV35S：BADH Micro-Tom。
　　 4.200 mM NaCl處理7天后，野生型植株萎蔫死亡，而轉(zhuǎn)基因植株仍然存活生長(zhǎng)。轉(zhuǎn)CaMV35S：BADH、P5：BADH基因提高了Micro-Tom的耐鹽性。
　　 5.野生型和兩種轉(zhuǎn)基因型植株在生長(zhǎng)培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和土壤中進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)CaMV