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1、東北師范大學(xué)碩士學(xué)位論文金針菇免疫調(diào)節(jié)蛋白的重組表達(dá)及生物學(xué)特性的初探姓名:徐貴雪申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):植物學(xué)指導(dǎo)教師:劉立俠20090601AbstractAfungalimmunomodulatoryprotein,F(xiàn)IPfveiSasmallproteinextractedfromFlammulinavelutipes,namedgoldenneedlemushroominChinawhichhasimmunomodulator
2、yactivitiesItobviouslytakesapartinphysiologyasantiallergydecreasingthegrowthofcancercells,intensifyinglotsofcytokinesfromTlymphocytesandSOonInthisstudytheFIPfvegeneWasclonedfromthegenomeoflocalgoldenneedlemushroom(Flammu
3、linavelutipes)WereconstructedtherecombinantexpressionvectorspPIC9KFIPfveandpET28()FIPfveandtransformedthetargetgeneintotheyeastPichiapastor捃GS1l5andEcoliBL21byelectroporationandthermaltransformationTheyeasttransformantsw
4、ereidentifiedbyculturemediaselectionTheyieldsoftherecombinantFIPfvewereabout152mg/Linyeastand30mg/Linbacteriarespectively111epurificationoftherecombinantproteinincludesionexchangechromatographDEAESepharoseFastFlowdialysi
5、sandlyophilizationnepurityofthereFIPfvewasprobably80%TheanTinoacidcompositionanalysisshowedthattherecombinantFIPhadthesanleaminoacidcomposeasthenatureone,nleCircularDichroismanalysisresultindicatedthatthesecondarystructu
6、reformWasdetectedandtherelativeproportionofthesestructureunitswassimilartothenaturalFIPwhichmightmeanthatthesimilarnatureandbioactive,reFIPfvewerecorrectlyfoldedandformedAndthephen01sulfuricacidmethodshowedthatthesugarco
7、ntentofthereFIPfveWaS42%implyingtheglycosylationintheyeastexpressionsystem功ebiologicalactivitiesofthepurifiedreFIPfveweretest功ereFIPfveexhibitedsimilarhemagglutinatingactivitytowardsredbloodcellstonatureproteinAndthereFI
8、PfvecallinduceGl/G0toSphaseofthecellcycleinperipheralbloodmononuclearcellswhichshowedthatreFIPfveseemedtobeanewmitogenInthispaperweclonedtheFIPfvegenewhichWasre—expressedinPichiapastorisandEcolfeffectivelyW色provedthatthe
9、recombinantFIPfvehadverysimilarbiologicalactivitiesasnatureFIPfve,whichwouldsupplysomebasisforfermentationbyalargescaleandtheapplicationsofreFIPfveintheantitumorantiallergic,healthorsupplementaryfoodsandmedicineinthefutu
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