金針菇AEC抗性突變株篩選.pdf

1、[目的]提高農(nóng)作物中人體與哺乳動(dòng)物必需氨基酸含量是育種工作的主要研究領(lǐng)域,8種必需氨基酸中的賴氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸和異亮氨酸皆以天冬氨酸為共同前體,通過(guò)不同的支路來(lái)代謝合成,其中賴氨酸還通常是影響氨基酸品質(zhì)的第一限制性氨基酸,賴氨酸結(jié)構(gòu)類似物S-(2-氨基乙基)-2'半胱氨酸(AEC)在天冬氨酸族代謝途徑和含量提高的研究中起著重要作用.該研究芎先觀察AEC對(duì)6種食用菌菌絲生長(zhǎng)的影響,探討其與6種食用菌氨基酸含量的相關(guān)性及食用菌間氨基酸

2、代謝的異同,在此基礎(chǔ)上,以金針菇單核菌絲產(chǎn)生的粉孢子為材料,通過(guò)紫外線誘變,以AEC為選擇培養(yǎng)基篩選具有AEC抗性的金針菇突變菌株,并測(cè)定突變株與出發(fā)菌株氨基酸含量,分析金針菇等食用菌天冬氨酸族氨基酸含量進(jìn)一步提高的可能性,為食用菌氨基酸品質(zhì)改良奠定理論與實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).[方法]1、配制含有不同AEC濃度的基本和完全培養(yǎng)基上,接種金針菇單核菌絲(IM02),培養(yǎng)觀察AEC對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制情況,并與AEC對(duì)白色茶樹(shù)菇,榆黃蘑,虎奶菇,杏鮑菇和姬

3、松茸抑制作用進(jìn)行比較,計(jì)算AEC對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制的IC<,50>;2、觀察紫外線和Co<'60>輻射對(duì)金針菇粉孢子致死效應(yīng);3、利用AEC選擇培養(yǎng)基,篩選出經(jīng)紫外線誘變,具有AEC抗性的金針菇單核菌株,純化后做抗性的穩(wěn)定性試驗(yàn),并通過(guò)液體發(fā)酵比較抗性菌株和出發(fā)菌株菌絲體游離氨基酸和總氨基酸的含量.4、將出發(fā)菌株IM02、抗性菌株與金針菇單核菌絲IS02雜交,通過(guò)觀察有無(wú)鎖狀聯(lián)合來(lái)鑒定菌株.[結(jié)果]1、AEC濃度在3000mg.L<'-1>

4、以上,金針菇單核菌絲的生長(zhǎng)被完全抑制;在基本培養(yǎng)基上,AEC對(duì)金針菇單核菌絲(IM02),白色茶樹(shù)菇,榆黃蘑,虎奶菇,杏鮑菇和姬松茸的半數(shù)抑制濃度分別為24.8,5754.1,159.4,21.7,1158.8和361.8 mg.L<'-1>;在完全培養(yǎng)基上,AEC對(duì)金針菇單核菌絲(IM02),白色茶樹(shù)菇,榆黃蘑,虎奶菇和杏鮑菇的半數(shù)抑制濃度分別為2792.3,379751.1,402.2,244.9和1576.7 mg.L<'-1>,

5、具有顯著的不同;2、紫外線和Co<'60>對(duì)金針菇單核菌絲產(chǎn)生粉孢子致死效應(yīng)分別較符合二次方程Y=3.7833+7.7874X-0.1481X<'2>和Y=0.4315+0.5768X-0.0008X<'2>;3、從AEC選擇培養(yǎng)基中篩選到一株AEC抗性穩(wěn)定的突變株A1.氨基酸測(cè)定表明,突變株A1在基礎(chǔ)培養(yǎng)基發(fā)酵的菌絲體游離的異亮氨酸、蘇氨酸和天冬氨酸族氨基酸總量分別比出發(fā)菌株IM02提高了49.4％、11.1％和17.6％;在完全培養(yǎng)

6、基發(fā)酵的菌絲體的游離氨基酸總含量提高了38.3％,其中,異亮氨酸、甲硫氨酸、蘇氨酸、賴氨酸和天冬氨酸族氨基酸總量分別提高了78.8％、63.6％、31.3％、14.3％和33.3％. 4、雜交試驗(yàn)表明,出發(fā)菌株IM02、突變株A1與金針菇單核菌絲IS02均形成了鎖狀聯(lián)合.[結(jié)論]1、所試驗(yàn)的6種食用菌對(duì)AEC抗性的顯著不同,反映出其代謝途徑中相關(guān)酶受終產(chǎn)物反饋抑制的敏感程度顯著不同,值得對(duì)其相關(guān)酶(如AK,等)作進(jìn)一步研究.2、AEC抗