肌肉注射GHRH表達(dá)質(zhì)粒促進(jìn)動(dòng)物生長在大鼠、豬和綿羊中的研究.pdf

1、該論文借鑒基因治療和基因疫苗的原理構(gòu)建了羊生長激素釋放激素的肌肉注射表達(dá)質(zhì)粒.我們利用牛的骨骼肌α-肌動(dòng)蛋白的調(diào)控元件,肌肉鈣粘蛋白M-cadherin的引導(dǎo)肽以及人工合成的羊GHRH核心序列共同構(gòu)建了可以直接在動(dòng)物體肌肉細(xì)胞內(nèi)異位表達(dá)并分泌GHRH的表達(dá)質(zhì)粒pGEM-A5A3f-M-GHRH(pM-GHRH).通過一次性簡單的肌肉注射這種質(zhì)粒就可以提高羊的增長速度,促進(jìn)體重增加.通過91天的實(shí)驗(yàn),注射1.15mg表達(dá)質(zhì)粒pM-GHRH

2、的實(shí)驗(yàn)組凈增重比對(duì)照組高2.5kg(p=0.078),日增重率也表現(xiàn)出顯著差異(0.84<0.01％vs0.73±0.04％,p<005).此外,在該實(shí)驗(yàn)中選用0.25％的布比卡因作為基因表達(dá)促進(jìn)劑,增強(qiáng)了表達(dá)質(zhì)粒pM-GHRH的促生長效果,只注射1mg的表達(dá)質(zhì)粒pM-GHRH,91天的凈增重比對(duì)照組高3.1kg(p<0.05),日增重率表現(xiàn)出更明顯的差異(0.85±0.01％vs0.73±0.04％,p<0.0025).同時(shí)沒有在注射

3、過質(zhì)粒的動(dòng)物身上發(fā)現(xiàn)發(fā)生組織性病變,此外組織中質(zhì)粒殘留低于80pg,可以認(rèn)為該質(zhì)粒在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中也將是安全的.該論文還構(gòu)建了兩種豬的生長激素釋放激素的肌肉表達(dá)質(zhì)粒ppG-A53f-H6-GHRH(ppG-H6)及ppG-A53f-H4-GHRH(ppG-H4).它們使用了豬的骨骼肌α-肌動(dòng)蛋白的調(diào)控元件以及人GHRH引導(dǎo)肽的人工合成的豬GHRH的核心序列.除此之外,還構(gòu)建了一種由ppG-A53f-H6-GHRH衍生的表達(dá)沉默的對(duì)照質(zhì)粒

4、ppG-S53f-H6-GHRH(ppG-SH6),作為說明ppG-A53f-H6-GHRH促生長功效的參照物.通過對(duì)大鼠的短期和長期的促生長實(shí)驗(yàn),說明豬的肌肉注射表達(dá)質(zhì)粒ppG-H6對(duì)大鼠的生長是有促進(jìn)效果的.在大樣本(n=30)的研究中,經(jīng)過0.3mg質(zhì)粒ppG-H6處理的實(shí)驗(yàn)組在第10天的凈增重比對(duì)照質(zhì)粒ppG-SH6組高12.4g(p<0.05),同時(shí)日增重率也表現(xiàn)為顯著(0.51±0.01％vs0.44±0.03％,p<0.0

5、5).30天的小樣本實(shí)驗(yàn)(10只)也得到類似的結(jié)果,ppG-H6組在第30天的凈增重上比ppG-SH6組高出31.8g(p=0.09),且日增重率表現(xiàn)也較顯著(3.05±0.06％vs2.74±1.32％,p=0.055).此外,在30天的組織樣本中檢測(cè)到了質(zhì)粒的存在,同時(shí)還通過RT-PCR證實(shí)了在肌肉組織中有質(zhì)粒的表達(dá).在豬的活體促生長實(shí)驗(yàn)中,通過豬肉注射1.5mg質(zhì)粒ppG-H6的初步實(shí)驗(yàn),獲得了體重平均日增重達(dá)13.07％的促生長