慢病毒肌肉注射介導(dǎo)人FⅧ基因在大鼠體內(nèi)的表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的：本研究制備攜帶人凝血因子VIII(hFVIII)基因的重組慢病毒，并肌肉注射到正常大鼠股四頭肌，觀察體內(nèi)的表達(dá)。 方法：將含hFVIII基因的慢病毒載體與包裝質(zhì)粒cMV△R8.74、包膜質(zhì)粒VSV-G轉(zhuǎn)染產(chǎn)毒細(xì)胞293T細(xì)胞，以制備包含EPO cDNA的重組慢病毒。將制備好的重組慢病毒感染HeLa細(xì)胞，檢測(cè)培養(yǎng)上清中hFVIII的表達(dá)量；直接肌肉注射正常大鼠后，檢測(cè)血漿中hFVIII抗原濃度和抗體。取注射部位組織中提取DN

2、A進(jìn)行PCR。 結(jié)果：48h后取上清測(cè)定hFVIII抗原高表達(dá)(0.7±0.1)ng/ml。將制備好的重組慢病毒(1×10<'8>IU/ml)直接肌肉注射到正常大鼠后血清中可檢測(cè)到高水平的hFVIII抗原，最高達(dá)(33.1±0.1)ng/ml，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)20周。血清hFVIII抗體第1周最高達(dá)(133.1±5.6)BU/ml，持續(xù)到實(shí)驗(yàn)期間。除在注射部位組織外，其它主要臟器均未觀察到hFVIII基因的存在。 結(jié)論：制備

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