灰樹(shù)花中一種抗病毒蛋白的純化及其性質(zhì).pdf

1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文灰樹(shù)花中一種抗病毒蛋白的純化及其性質(zhì)姓名：陳寧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：林奇英謝聯(lián)輝2002.5.1福建農(nóng)林大學(xué)碩：仁學(xué)位論文摘要通過(guò)硫酸銨分級(jí)沉淀、陰離子交換柱層析以及凝膠過(guò)濾柱層析，從灰樹(shù)花(Grifolafrondosa)子實(shí)體中分離到了一種具有抑制煙草花葉病毒侵染活性的熱穩(wěn)定性糖蛋白GFAP。提純的GFAP經(jīng)常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳和等電聚焦電泳顯示為單一條帶，表明已達(dá)到電泳純。我們研究了

2、它的理化性質(zhì)、對(duì)煙草花葉病毒的抗性。并制備了它的抗血清。而SDS—PAGE結(jié)果證明該蛋白含有大小不同的兩個(gè)亞基，其相對(duì)分予質(zhì)量分別為34kD、40kD。等點(diǎn)聚焦測(cè)定其等電點(diǎn)為376，為酸性蛋白。用酚硫酸法測(cè)得GFAP是一個(gè)己糖含量約為2％的糖蛋白。經(jīng)測(cè)定GFAP的40kD亞基條帶的N端氨基酸序列為ACCVPSVTEFENA／NSDPVM，將其與GenBank中的蛋白氨基酸序列檢索比較，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)同源序列，說(shuō)明其可能為一種新蛋白。GFAP在

3、80“(2水浴lO分鐘后仍可保持約80％的抗TMV侵染的活性，表明它是一個(gè)熱穩(wěn)定性蛋白。將GFAP與TMV混合接種心葉煙，當(dāng)GFAP的濃度為32g／ml時(shí)，即可以完全抑制濃度為lOng／mlTMV的侵染，而4pg／ml的GFAP對(duì)濃度為40g／mlTMV的抑制率仍可達(dá)60％以上。而在系統(tǒng)侵染寄主普通煙K326上的測(cè)定結(jié)果顯示，GFAP不能抑制TMV在寄主植物體內(nèi)的增殖和擴(kuò)展，也不能誘導(dǎo)寄主對(duì)病毒的系統(tǒng)抗性。它對(duì)供試的3種病原真菌：灰葡萄