花生甘油-3-磷酸?；D移酶基因(GPAT9)表達載體構建及轉化研究.pdf

1、花生是我國重要的油料作物之一，提高含油量對花生育種具有重要意義。植物貯藏油脂主要以三酰甘油(TAG)的形式存在于種子中，是由1分子甘油與3分子脂肪酸通過酯鍵相結合而成，是大多數(shù)生物中貯存能量和供給能量的主要形式。本研究構建了花生甘油-3-磷酸?；D移酶基因（GPAT9)的表達載體，并利用農桿菌介導途徑將其導入花生栽培種，獲得GPAT9過表達的轉基因植株。
　　主要研究結果如下:
　　(1)花生GPAT9基因過表達載體的構建<

2、br>　　利用限制性內切酶BamHⅠ和NotⅠ酶切重組質粒pEASY-GPAT9和載體質粒pGBVE，分別進行瓊脂糖凝膠電泳，回收目的DNA和載體DNA片段，用T4DNA連接酶將目的DNA片段與載體pG VE大片段連接，將重組DNA轉化至大腸桿菌中，DNA測序結果表明攜帶AhGPAT9的過表達載體pGBV-G PA T9構建成功，將其轉入農桿菌LBA4404。
　　(2)花生GPAT9基因反義表達載體的構建
　　為了將目的基

3、因GPAT9反向插入表達載體中，在其上下游引物中引入NotⅠ和BamHⅠ識別序列，以pGBV-GPAT9為模板經PCR擴增，獲得兩端帶有NotⅠ和BamHⅠ酶切位點的目的基因，命名為RGPAT9，與載體pEASY-T1連接獲得pEASY-RGPAT9，重組質粒pEASY-RGPAT9轉入大腸桿菌繁殖后，利用限制性內切酶BamHⅠ和NotⅠ雙酶切，回收目的基因片段，與植物表達載體質粒pGBVE大片段連接，將重組DNA轉化至大腸桿菌中，DN

4、A測序結果表明攜帶AhGPAT9的反義表達載體pGB V-RGPAT9構建成功，將其轉入農桿菌LBA4404。
　　(3)花生GPAT9基因的遺傳轉化
　　以花生栽培種豐花2號的胚小葉為外植體，通過農桿菌介導法，將GPAT9基因轉入花生中，共侵染外植體26703個，獲得1178株再生苗，篩選得到151株抗PPT的試管苗，PCR檢測獲得陽性苗100株，其中27株生根，經擴繁煉苗后移栽大田。
　　(4)花生反義GPAT9基