抗紋枯病基因篩選技術(shù)的建立及基因消除PCR技術(shù)的驗證.pdf

1、玉米是世界上最重要的幾種農(nóng)作物之一，是繼水稻、小麥和粟之后的第四大種植面積的作物。玉米紋枯病(maizesheathblight)是玉米上的一種非常具有破壞性的病害，通常造成11.0％到40.0％的產(chǎn)量損失，嚴(yán)重時可以達到90％以上。立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)AG1-IA是引起玉米紋枯病的最主要病原菌。盡管在BLSB(bandedleafandsheathblight)領(lǐng)域已經(jīng)進行了一些年的研究，但玉米對BLSB的

2、遺傳抗性仍然不清楚。玉米抗性育種的主要瓶頸是可用的抗性種子資源有限，而且抗性不持久。
　　本實驗采集了武漢地區(qū)48科107種植物，通過離體葉片接紋枯菌實驗，確定有34科56種植物表現(xiàn)發(fā)病嚴(yán)重，14科51種植物表現(xiàn)不發(fā)病或輕微發(fā)病。根據(jù)接病結(jié)果，確定了天南星科的半夏和虎掌不能被紋枯菌致病，并成功克隆了半夏(Pinelliapedatisecta)、虎掌(Pinelliaternata)和天麻（GastrodiaelataBl.）的凝

3、集素基因?？共〔牧习胂牡陌l(fā)現(xiàn)和三種凝集素基因的克隆為下一步如何利用它們來研究抗紋枯病提供了條件。
　　以半夏為抗病材料，構(gòu)建半夏葉片cDNA文庫。利用農(nóng)桿菌瞬時表達系統(tǒng)和pTRV病毒載體建立了煙草葉片表達外源基因的體系。此技術(shù)為一種快速、方便的篩選半夏中抗性基因或抗性相關(guān)基因方法，同時也可以用于驗證某些功能未知的基因的功能。
　　小麥和大麥白粉病是一種世界性病害，對作物的產(chǎn)量和質(zhì)量均能造成較大的損失，其病原菌分別為Blume

4、riagraminisf.sp.tritici(Bgt)、Blumeriagraminisf.sp.hordei(Bgh)。Bgt、Bgh均為布氏白粉菌種下的八個?；椭?，在進化上二者親緣關(guān)系十分接近，但卻有著嚴(yán)格的寄主選擇性，這就為研究病原物與植物之間的非寄主互作（包括病原物的寄生專化性和寄主植物的非寄主抗性）提供了良好的研究材料。
　　本實驗室建立的R-PCR技術(shù)恰好可以對Bgt、Bgh之間的差異做比較分析。利用此技術(shù)，我們