瘋草內(nèi)生真菌——Undifilum oxytropis合成苦馬豆素的研究.pdf

1、瘋草是豆科棘豆屬和黃芪屬含有苦馬豆素的有毒植物的統(tǒng)稱，其主要毒性成分為苦馬豆素(swainsonine，SW)，它是導(dǎo)致動(dòng)物瘋草中毒的根本原因。近年研究表明，瘋草內(nèi)普遍存在能產(chǎn)生SW的內(nèi)生真菌——彎曲牙管蠕孢菌（Undifilumspp），該類內(nèi)生真菌是瘋草中SW產(chǎn)生的主要因素，抑制或阻斷內(nèi)生真菌合成SW，將有望降低或消除瘋草的毒性。目前，瘋草內(nèi)生真菌中的SW合成途徑仍不清楚，研究各種因素對(duì)SW合成的影響可為進(jìn)一步闡釋瘋草內(nèi)生真菌中SW

2、的生物合成途徑和分子調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。本文主要對(duì)瘋草中產(chǎn)SW內(nèi)生真菌進(jìn)行分離與鑒定，并研究不同因素對(duì)瘋草內(nèi)生真菌合成SW的影響，產(chǎn)SW內(nèi)生真菌原生質(zhì)體制備及再生，為進(jìn)一步闡釋瘋草內(nèi)生真菌中SW的生物合成途徑、分子調(diào)控機(jī)制及瘋草內(nèi)生真菌突變菌株的選育奠定基礎(chǔ)。
　　1.從寧夏黃花棘豆中共分離到5株真菌，其中菌株NX-FEL001菌絲中含有苦馬豆素，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)，該菌株能夠產(chǎn)生分生孢子及分生孢子梗等結(jié)構(gòu)，序列同源性和系統(tǒng)發(fā)育分析表明該菌

3、株與Undifilumoxytropis真菌的親緣關(guān)系最近，根據(jù)形態(tài)結(jié)構(gòu)和分子進(jìn)化分析結(jié)果將菌株NX-FEL001鑒定為U.oxytropis。
　　2.研究不同pH、聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)、L-哌可酸、L-賴氨酸、α-酮戊二酸對(duì)U.oxytropis的生長和SW合成的影響。結(jié)果表明，當(dāng)pH在4.5～6.5之間時(shí)，pH對(duì)U.oxytropis的生長無顯著影響，但在該范圍內(nèi)，較低的pH可抑制真菌SW

4、的合成;PEG可促進(jìn)U.oxytropis的生長，但會(huì)抑制真菌SW的合成;L-哌可酸可顯著促進(jìn)U.oxytropis的生長，當(dāng)其在培養(yǎng)基中的初始濃度為10-3mol/L和10-2mol/L時(shí)，真菌中SW的合成受到抑制，當(dāng)其濃度為10-4mol/L時(shí)，真菌中SW的合成顯著增加;當(dāng)培養(yǎng)基中L-賴氨酸的初始濃度為10-3mol/L時(shí)，U.oxytropis中SW的合成顯著增加，而當(dāng)，L-賴氨酸的初始濃度為10-1mol/L、10-2mol/L

5、或10-4mol/L時(shí)，真菌的SW合成受到顯著抑制。當(dāng)培養(yǎng)基中α-酮戊二酸的初始濃度分別為10-1mol/L、10-2mol/L、10-3mol/L時(shí)，U.oxytropis生長及SW合成的受到抑制;以上研究結(jié)果表明，L-哌可酸、L-賴氨酸、α-酮戊二酸可能是U.oxytropis合成SW的前體物質(zhì)。
　　3.懸菌液涂布于固體培養(yǎng)基上22℃培養(yǎng)15d，以1mol/L山梨醇配制1％纖維素酶+1％蝸牛酶+0.1％溶壁酶組成的復(fù)合酶系，