金龜子綠僵菌發(fā)酵液成分分析及苦馬豆素的初步分離.pdf

1、目的：通過對金龜子綠僵菌進行傳代培養(yǎng)以及液態(tài)發(fā)酵，獲得含有金龜子綠僵菌次級代謝產物的發(fā)酵液，并對發(fā)酵液進行成分分析，初步確定發(fā)酵液的主要物質組成成分。在此基礎上，根據(jù)組成成分的各自特點，旨在采取離心、分離、萃取、純化等措施從金龜子綠僵菌中分離得到苦馬豆素(swainsonine,SW)，為新型抗腫瘤輔助藥物SW的獲得提供清晰的分離思路。 方法：(1)采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)對金龜子綠僵菌定期進行傳代培養(yǎng)，4℃保存：采

2、用改良查氏培養(yǎng)液對金龜子綠僵菌進行發(fā)酵培養(yǎng)，收集發(fā)酵液；(2)參照植物成分分析的方法對金龜子綠僵菌發(fā)酵液的組成成分進行分析；(3)首先采用高速離心、微孔濾過、樹脂吸附等方法對發(fā)酵液進行預處理，再運用薄層層析檢測技術和紫外分光光度法對目標成分SW進行檢測，然后，在強堿性條件下用正丁醇反復萃取、負壓層析分離、減壓升華等方法對發(fā)酵液進行分離提取；(4)采用氣相色譜對升華產物中目標成分SW進一步確認。 結果：(1)在25-26℃，濕度4

3、5～55％，pH值為6.5～7.0，養(yǎng)分充足的條件下，金龜子綠僵菌生長良好；(2)金龜子綠僵菌發(fā)酵液中主要成分包括：生物堿(SW)、氨基酸、蛋白質、有機酸、鞣質、酚類、油脂、揮發(fā)油、萜類、甾體，糖類和無機鹽，其中生物堿的特征顯色反應最為明顯；(3)薄層層析和紫外分光光度法檢測顯示，升華產物中含有與苦馬豆素對照品基本一致的特征顯色反應和紫外吸收曲線的成分；(4)采用氣相色譜法對升華產物進行檢測，結果顯示其出峰時間、峰形均與SW對照品接近。