金龜子綠僵菌內(nèi)生性及對花生生長促進(jìn)作用.pdf

1、金龜子綠僵菌(Metarhizium anisopliae)用于防治農(nóng)作物害蟲，可與植物發(fā)生相互作用。已發(fā)現(xiàn)綠僵菌對一些植物有促生長作用和內(nèi)生性。為探討綠僵菌在防治花生蠐螬中對花生生長的影響及內(nèi)生性，本文研究了施用綠僵菌對花生早期發(fā)育及整個生長期生長的影響，分析其花生根中的內(nèi)生性，為確定綠僵菌的內(nèi)生定植和定位還構(gòu)建了egfp工程菌株。主要研究結(jié)果如下:
　　1.綠僵菌對花生種子萌發(fā)和根早期發(fā)育的影響?；ㄉシN時以澆灌和種衣方式施菌

2、，檢測播種后3d內(nèi)種子萌發(fā)率和16d內(nèi)主根長度及側(cè)根數(shù)，同時檢測根際綠僵菌種群數(shù)量。結(jié)果表明，綠僵菌對種子萌發(fā)無影響(P＞0.05);種衣施菌對主根長度、側(cè)根生長無影響(P＞0.05)，而澆灌施菌的主根長度、側(cè)根數(shù)在4d-10d比對照顯著增加(P＜0.05)。兩種施菌處理的根際綠僵菌種群在施菌后初始8d內(nèi)呈現(xiàn)由小幅波動到緩慢下降趨勢，8d-12d內(nèi)明顯下降，斜率分別為0.637和0.268。相關(guān)分析表明，澆灌施菌后4d-16d內(nèi)的主根長

3、度與對照的比值、側(cè)根數(shù)與對照的比值均與綠僵菌群數(shù)量顯著相關(guān)（P=0.0216，R=0.8273主根根長;P=0.0032，R=0.9213側(cè)根數(shù)量）。說明綠僵菌能促進(jìn)花生根早期發(fā)育，相比種衣施菌，澆灌施菌是更適宜的施菌方式。
　　2.綠僵菌對花生整個生長期生長的影響。設(shè)置花生播種期施菌和初花期施菌處理，每15d檢測株高、株重等11個生長參數(shù)及根際綠僵菌種群數(shù)量。結(jié)果表明，初花期施菌的葉片數(shù)、下針數(shù)、好果數(shù)、地上和根及果干濕重顯著(

4、P＜0.05)高于對照，播種期施菌與對照無顯著差異(P＞0.05)。相比播種期施菌，初花期施菌的根際綠僵菌有較高的定植率和增殖率，其種群高峰期菌量為初始量1.46倍，且與蠐螬種群高峰期吻合，防治蠐螬效果顯著。播種期施菌的綠僵菌種群高峰期菌量為初始量0.69倍，與蠐螬種群錯峰，防治蠐螬效果明顯低于苗期施菌。因此，綠僵菌對花生生長有促進(jìn)作用，初花期施菌作用更為顯著，且防治蠐螬效果更好。
　　3.綠僵菌在花生根中內(nèi)生性檢測。根據(jù)菌株IT

5、S序列和標(biāo)記基因benA3序列，設(shè)計并篩選得到2對特異性引物，對目標(biāo)菌株檢測的靈敏度分別達(dá)到1∶2000和1∶1000。以兩對特異性引物PCR和選擇培養(yǎng)檢測接種的花生根樣品，結(jié)果從曲期施菌75d和90d的根樣品中檢測到特異DNA條帶和目標(biāo)菌落，證明了綠僵菌在花生根中內(nèi)生定植。
　　4.綠僵菌egfp工程菌株的構(gòu)建。構(gòu)建了以egfp為報告基因、苯菌靈抗性基因benA3為標(biāo)記基因的Camben-eGFP表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化綠僵