金龜子綠僵菌種衣劑的研制.pdf

1、本研究以金龜子綠僵菌（Metarhizium anisopliae）為活性成分，以玉米蠐螬為目標(biāo)害蟲，通過各種助劑的優(yōu)化配伍，研制出金龜子綠僵菌的生物型種衣劑。用綠色熒光蛋白給金龜子綠僵菌標(biāo)記，采用已研制的配方給玉米種子包衣，定期測定金龜子綠僵菌在玉米根際的定殖情況，評價(jià)了該種衣劑防治地下害蟲的潛力。并通過玉米田間試驗(yàn)，證明了該劑型的實(shí)際應(yīng)用效果。
　　 通過生物測定，比較了布氏白僵菌和金龜子綠僵菌的五個(gè)菌株對暗黑鰓金龜?shù)亩玖Α?/p>

2、在濃度為1×107孢子/ml時(shí)，Bbr06、Bbr17、Ma09、Ma20、Ma55的侵染率分別為13.33％、22.22％、42.22％、68.89％、95.56％，其中以Ma55最高。當(dāng)濃度為1×107、1×108、1×109孢子/ml時(shí)，其LT50分別為10.93、9.12、7.65d。
　　 在種衣劑劑型研究中，以Ma55為試驗(yàn)菌株，通過溶劑油、成膜劑、抗氧化劑、植物生長調(diào)節(jié)劑與其分生孢子的長期相容性試驗(yàn)，得出最佳助劑。

3、孢油比為0.2g/ml、0.1g/ml、0.05g/ml時(shí)，B油第90d的萌發(fā)率均顯著高于其他溶劑油（P<0.05）；且都顯著高于對照組室溫和25℃時(shí)的萌發(fā)率（P<0.05）；同時(shí)，與4℃對照組萌發(fā)率差異不顯著（P>0.05）。由此可以得出B油為最佳油劑油。成膜劑JX各項(xiàng)物理指標(biāo)都是最優(yōu)的，種子出苗率與對照組差異不顯著（P>0.05），且成膜劑JX在三種濃度下（0.1％、0.5％、1％）萌發(fā)率均顯著高于其他兩種（P<0.05）。在三種不

4、同的濃度下（0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml），TBHQ都表現(xiàn)出更為優(yōu)異的清除自由基活性；在相容性試驗(yàn)中，當(dāng)濃度為0.1mg/ml時(shí)，孢子萌發(fā)率顯著高于其他兩種（P<0.05）。在植物生長調(diào)節(jié)劑的試驗(yàn)中，在NAA的三種濃度下（1ppm、2ppm、3ppm），孢子萌發(fā)率顯著高于6-BA（P<0.05）。從而得出最佳助劑為B溶劑油、JX、TBHQ、NAA。
　　 采用二次通用回歸旋轉(zhuǎn)設(shè)計(jì)的方法研究了成膜劑、抗氧化

5、劑、植物生長調(diào)節(jié)劑的最佳配比。通過對比實(shí)驗(yàn)，結(jié)合各助劑的特性得出金龜子綠僵菌種衣劑的配方為：B油劑油，孢油比為0.1g/ml，成膜劑為0.05％的JX，抗氧化劑為0.1mg/ml的TBHQ，植物生長調(diào)節(jié)劑為2ppm的NAA。
　　 在研究金龜子綠僵菌在玉米根際的定殖試驗(yàn)中，利用草胺磷抗性基因bar為篩選標(biāo)記，將綠色熒光蛋白基因（gfp）轉(zhuǎn)入載體pbarGPE1，得到了組成性表達(dá)載體pGPE-GFP，并轉(zhuǎn)入金龜子綠僵菌Ma55，獲

6、成功表達(dá)。用含有g(shù)fp基因的金龜子綠僵菌孢子粉配制種衣劑，并給玉米種子包衣。對玉米苗期根際定殖情況進(jìn)行定期取樣觀測。結(jié)果表明，與非根際土壤相比，在根際土壤中被標(biāo)記的綠僵菌的帶菌量不僅最大，而且在播種后第10天數(shù)量達(dá)到最大，然后在第20～30d內(nèi)數(shù)量即不再顯著變動。相比之下，非根際土壤中的帶菌量不僅極顯著少于根際土壤，且隨時(shí)間的延長明顯降低；在表層土中的帶菌量很低，而且也隨時(shí)間的延長顯著降低。這些證據(jù)表明，應(yīng)用該種衣劑劑型，金龜子綠僵菌孢

7、子在玉米根際有較高活力和定殖效果，從而為該生物型種衣劑防治地下害蟲的利用潛力提供了依據(jù)。
　　 分別以三種包衣濃度（1：10、1：25、1：50）對玉米做了田間試驗(yàn)，在播種后第10天統(tǒng)計(jì)其出苗率。出當(dāng)包衣比例為1：25、1：50時(shí)，出苗率與對照組差異不顯著（P>0.05）；在第30天時(shí)，統(tǒng)計(jì)防蟲效果。當(dāng)包衣比例為1：10、1：25時(shí)，蟲害苗率均與對照組差異顯著（P<0.05），而以1：25效果較好。這表明金龜子綠僵菌種衣劑對防治