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文檔簡介
1、雙元細(xì)菌人工染色體(binarybacterialartificialchromosome,BIBAC)是一類可以在大腸桿菌與農(nóng)桿菌中穿梭的載體,它除了可以構(gòu)建大片段DNA文庫,還可以將大片段DNA直接轉(zhuǎn)入植物。它是基因圖位克隆、功能分析等的重要工具,目前該項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)被廣泛的運(yùn)用。
“能飼一號”甜高粱含有諸多的優(yōu)良性狀,構(gòu)建“能飼一號”甜高粱BIBAC文庫有助于篩選優(yōu)良基因并將其轉(zhuǎn)化入其它植物體中,突破物種間的隔離,從而對
2、植物性狀改良提供幫助。水稻是最重要的經(jīng)濟(jì)作物,選擇水稻進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化具有深遠(yuǎn)的意義。
本課題圍繞水稻遺傳轉(zhuǎn)化展開準(zhǔn)備工作,以“能飼一號”甜高粱嫩葉為材料,構(gòu)建了BIBAC文庫,并對文庫進(jìn)行了BIBAC末端測序以及BIBAC克隆在大腸桿菌、農(nóng)桿菌中的穩(wěn)定性檢測。
“能飼一號”甜高粱BIBAC文庫總克隆數(shù)為51840,空載率為2.29%,平均插入片段大小為110.7kb,線粒體、葉綠體污染率分別為0.1%和2.2%
3、,文庫的覆蓋度為7.65×(高粱全基因組大小為750Mb)。
將144個克隆進(jìn)行BIBAC末端測序,成功獲得252個末端序列,末端測序成功率達(dá)到87.5%,平均長度為579.0bp,得到總長為145913bp的末端序列,占高粱全基因組大小的0.02‰。經(jīng)Repeat-masker處理后,發(fā)現(xiàn)反轉(zhuǎn)錄因子(Retroelements)在重復(fù)序列中所占的比例最高,占總長的46.59%。參考高全基因組序列,對BIBAC末端序列進(jìn)行
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