海濱雀稗高頻再生體系的建立及耐寒突變體篩選.pdf

1、海濱雀稗(PaspalumvaginatumSw.)是禾本科(Gramineae)黍族(Paniceae)雀稗屬(Paspalum)的多年生草本植物，具有較強(qiáng)的耐鹽能力，較高的耐干旱、耐澇、耐貧瘠、耐蔭性和耐磨損性。但與常用的暖季型草坪草狗牙根、結(jié)縷草相比，海濱雀稗綠期短且抗寒性較差。因此，培育抗寒型海濱雀稗新種質(zhì)，對(duì)華東沿海地區(qū)城市綠化和灘涂生態(tài)環(huán)境建設(shè)具有重要的實(shí)踐意義。與傳統(tǒng)育種手段相比，現(xiàn)代生物技術(shù)育種可大大縮短育種周期，提高育

2、種效率，而建立高效的再生體系是進(jìn)行海濱雀稗遺傳轉(zhuǎn)化和體細(xì)胞突變體篩選的先決條件。本研究以海濱雀稗(Pvaginatum)'Seaspary'的成熟種子為外植體，運(yùn)用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和單因素試驗(yàn)相結(jié)合，以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加不同濃度的2，4-D、6-BA、NAA、KT、CuSO4、AHC等外源物質(zhì)，分析其對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)、胚性愈傷組織分化的影響，從而建立海濱雀稗高頻再生體系，為基因工程育種奠定基礎(chǔ);在建立海濱雀稗高頻再生體系的基礎(chǔ)上，以胚性愈

3、傷組織為材料，分別進(jìn)行2℃和6℃的低溫誘導(dǎo)和篩選，并分化成再生植株;對(duì)再生植株進(jìn)行15℃/10℃和5℃/3℃（晝/夜）的低溫脅迫，觀察草坪質(zhì)量并測(cè)定其它生理指標(biāo)，評(píng)價(jià)低溫下經(jīng)過篩選的再生植株的耐寒能力。本研究主要結(jié)果如下:
　　1.通過研究不同消毒時(shí)間對(duì)成熟種子發(fā)芽率、愈傷組織誘導(dǎo)率及胚性愈傷組織誘導(dǎo)率的影響，確定最佳的消毒時(shí)間為30min。
　　2.通過2，4-D、6-BA、CuSO4、AHC4因素4水平的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，確

4、定的最佳發(fā)芽培養(yǎng)基為2，4-D2.0mg/L+AHC0.5g/L，其發(fā)芽率為97.50％;最佳愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為2，4-D3.0mg/L+CuSO410.0mg/L，出愈率為97.50％;最佳胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為2，4-D3.0mg/L+CuSO415.0mg/L+AHC1.0g/L，胚性出愈率可達(dá)66.88％。
　　3.通過單因素的試驗(yàn)確定最佳的繼代培養(yǎng)基為MS+2，4-D3.0mg/L+KT0.1mg/L。
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5、.通過6-BA、KT、CuSO4、NAA4因素4水平的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，確定最佳的分化培養(yǎng)基為MS+6-BA8.0mg/L+KT0.05mg/L+CuSO410.0mg/L+NAA0.5mg/L，其分化率為95.00％。
　　5.以海濱雀稗的胚性愈傷組織為材料，經(jīng)2℃和6℃低溫誘導(dǎo)和篩選后，除處理90d的胚性愈傷組織外，均得到了再生植株。
　　6.2℃下培養(yǎng)45d、60d的再生植株經(jīng)15℃/10℃和5℃/3℃的低溫脅迫，測(cè)定葉片