高白鮭性腺發(fā)育的組織學(xué)研究及GnRH的分布與克隆.pdf

1、高白鮭作為一種重要經(jīng)濟魚類,已于1998年引入新疆賽里木湖。該魚生長迅速、肉味鮮美、適應(yīng)性強,主要以浮游動物為食,體長可達到55cm,體重達3kg,已經(jīng)成為帶動新疆冷水魚繁殖領(lǐng)域不可或缺的一部分。但是,高白鮭生殖器官成熟轉(zhuǎn)化非?？?群體繁殖期非常短,這就造成采卵時時間上不易把握,最后導(dǎo)致魚苗的低產(chǎn)。另外,在賽里木湖的自然氣候條件下,高白鮭的繁殖率非常低,且大部分選自自繁后代,如此經(jīng)過多年的生殖隔離和多代近交,引起了養(yǎng)殖性狀不同程度的退化

2、。目前賽里木湖種苗供應(yīng)不足,使很多地方引種后建立的獨立繁殖小群體也受到影響,由于魚苗的投放量不夠,而導(dǎo)致高白鮭市場的供應(yīng)量嚴(yán)重不足。目前,高白鮭的人工繁殖仍然處于摸索階段,而如何促進性腺發(fā)育成熟就成了生產(chǎn)上亟待解決的問題。所以,開展對高白鮭的生殖生物學(xué)的研究非常迫切。
　　GnRH作為控制垂體促黃體激素(LH)和卵泡刺激素(FSH)釋放的重要因素,在魚類生殖過程中起著重要的作用。在脊椎動物生長發(fā)育、生殖行為、妊娠、分娩繁殖等過程中

3、,主要參與調(diào)節(jié)類固醇的生成、細(xì)胞增殖、受精、粘連細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞遷移等生理活動。由于GnRH在魚類生產(chǎn)中具有重要的潛在應(yīng)用價值,所以魚類GnRH及其受體的研究已成為生殖內(nèi)分泌研究的熱點之一。為了進一步了解GnRH在該魚的繁殖過程中所扮演的角色,掌握該魚的繁殖規(guī)律和催產(chǎn)的最佳時間,提高催產(chǎn)效果,克服目前人工繁殖困難的狀況。本研究分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)和實時熒光定量的方法檢測了cGnRH-Ⅱ在性成熟髙白鮭神經(jīng)系統(tǒng)和性腺中的分布定位情況,以及該

4、基因在高白鮭各個組織中的分布情況,研究結(jié)果將為高白鮭性腺的組織學(xué)研究提供基礎(chǔ)資料。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　1.髙白鮭性腺的組織學(xué)研究
　　通過光學(xué)顯微鏡對新疆賽里木湖高白鮭性腺的組織學(xué)結(jié)構(gòu)進行了研究。結(jié)果表明,高白鮭的精巢為小葉型,其精原細(xì)胞存在于精小葉內(nèi)壁上,精母細(xì)胞和未成熟的精子細(xì)胞位于精小囊中,精子成熟后精小囊破裂釋放精子進入小葉腔,完成發(fā)育過程,精小葉間存在大量的間質(zhì)細(xì)胞、毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞。高白鮭卵巢

5、是發(fā)育到第Ⅳ時期的卵巢,卵巢內(nèi)存在不同發(fā)育時相的卵母細(xì)胞。
　　2.GnRH在性成熟高白鮭神經(jīng)系統(tǒng)及性腺中的分布定位
　　應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法,系統(tǒng)的觀察了性成熟期高白鮭(Coregonus peled)神經(jīng)系統(tǒng)及性腺中的促性腺激素釋放激素(GnRH)的分布情況。結(jié)果表明,GnRH在大腦、小腦、中腦、脊髓、延髓中免疫陽性反應(yīng)明顯,且主要分布在神經(jīng)元。GnRH免疫陽性細(xì)胞在卵巢和精巢中均有分布,而且其陽性部位在卵巢主要分布于

6、小生長期卵母細(xì)胞;在精巢中主要分布于間質(zhì)細(xì)胞和精原細(xì)胞中。本文討論了GnRH直接或間接參與高白鮭性腺發(fā)育成熟調(diào)節(jié)的可能性。研究結(jié)果將為下丘腦-垂體-性腺軸、神經(jīng)-內(nèi)分泌、GnRH功能的多樣性等研究領(lǐng)域提供新的形態(tài)學(xué)依據(jù)。
　　3.GnRH在性成熟髙白鮭中的克隆與表達
　　本實驗在對性成熟高白鮭(Coregonus peled)促性腺激素釋放激素(gonadotropin releasing hormones,GnRH)基因克

7、隆和測序的基礎(chǔ)上,設(shè)計實時定量PCR引物,以β-actin為內(nèi)參基因,采用△△Ct相對定量PCR方法檢測cGnRH-II基因mRNA在不同器官組織中的表達。以建立檢測性成熟高白鮭cGnRH-II基因mRNA相對轉(zhuǎn)錄水平的實時定量PCR方法,分析cGnRH-II在不同器官組織中的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明cGnRH-II基因在各個組織中均有不同程度的表達;特別是在魚腦、心臟和卵巢中有較高的表達,分別為肌肉組織中的317.86倍、122.79倍和7