毛竹脫落酸相關(guān)基因的克隆及輻射對(duì)其表達(dá)的影響.pdf

1、毛竹生長(zhǎng)快，產(chǎn)量大，材質(zhì)好，為可再生資源，可用于生產(chǎn)地板、竹模板、家具等。近年來(lái)，木材資源供需矛盾突出，毛竹林培育利用引起國(guó)家高度重視。毛竹林經(jīng)營(yíng)上出現(xiàn)的開(kāi)花現(xiàn)象會(huì)導(dǎo)致竹林成片死亡。由于竹子開(kāi)花時(shí)間和地點(diǎn)不確定，種子難于收集，毛竹常規(guī)育種困難，其輻射育種得到重視。本文使用的輻射源是60Coγ輻射，輻射劑量為15Gy、30Gy、60Gy、90Gy、120Gy對(duì)毛竹種子進(jìn)行處理，應(yīng)用高效液相色譜法，檢測(cè)種子在不同萌發(fā)階段的內(nèi)源ABA和ZR的

2、含量變化;同時(shí)從毛竹中克隆出ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的一種重要酶(蛋白磷酸酶2C)的基因PhePP2C，通過(guò)采用熒光定量PCR的方法，研究該基因在輻射處理后的種子中的表達(dá)情況。結(jié)果如下:
　　 本文采用優(yōu)化后的高效液相色譜法檢測(cè)毛竹種子中內(nèi)源激素含量，提高了內(nèi)源激素的回收率。采用WatersC18反相色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm，柱溫35℃，流動(dòng)相為乙腈:0.02％的磷酸緩沖液，流速1ml/min，測(cè)得的ABA和ZR的回收率分別為9

3、3.0％和83.7％，此條件下ABA和ZR的分離效果好。
　　 研究了不同劑量60Coγ輻射對(duì)毛竹種子萌發(fā)過(guò)程中內(nèi)源激素ABA和ZR含量的影響。在種子萌發(fā)過(guò)程中，當(dāng)種子經(jīng)15Gy和30Gy輻射處理后，與對(duì)照相比，種子提前12h萌發(fā)，表明輻射處理后加快了種子的萌發(fā)進(jìn)程，ZR/ABA高于對(duì)照，有利于種子打破休眠;當(dāng)輻射劑量為60Gy、90Gy、120Gy時(shí)，ZR含量降低，ABA含量增多，ZR/ABA值與對(duì)照相比較小，輻射抑制萌發(fā)。低

4、劑量(15Gy～30Gy)的60Coγ射線輻射可以促進(jìn)種子萌發(fā)進(jìn)程，較高劑量(60Gy～120Gy)的60Coγ射線輻射可以抑制毛竹的萌發(fā)進(jìn)程，同時(shí)也說(shuō)明內(nèi)源ABA和ZR在種子中的含量比值關(guān)系與正常萌發(fā)密切相關(guān)。
　　 采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，對(duì)毛竹PhePP2C基因進(jìn)行了克隆。序列分析表明，該基因閱讀框?yàn)?90bp，閱讀框可以編碼的蛋白質(zhì)由329個(gè)氨基酸組成，經(jīng)生物信息學(xué)軟件分析，在N端有由31個(gè)氨基酸序列組成的信號(hào)肽片段，并

5、且推測(cè)該蛋白沒(méi)有跨膜結(jié)構(gòu)域。本文克隆出的PhePP2C基因與玉米（Zeamays）、水稻（Oryzasativa）、小麥（Triticumaestivum）相應(yīng)的氨基酸序列相似性分別為91％、79％、83％。
　　 提取輻射處理過(guò)的毛竹種子、胚根、胚芽中的RNA，采用QRT-PCR技術(shù)對(duì)PhePP2C基因在不同處理中的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析。種子剛吸脹后，不同劑量的60Coγ輻射處理后的種子中PhePP2C基因的表達(dá)量均低于對(duì)照。隨