兩株深海來源抗茶葉病原真菌生防菌的發(fā)酵優(yōu)化及其劑型的研制.pdf

1、中國是茶葉的故鄉(xiāng)，福建是中國主要產(chǎn)茶區(qū)。茶樹病蟲害種類繁多、發(fā)生危害大，各種茶葉病蟲害不僅造成茶葉減產(chǎn)、品質(zhì)下降。若茶園不合理用藥，還會導(dǎo)致農(nóng)藥殘留超標，污染環(huán)境，影響消費者健康，也嚴重阻礙茶葉出口。實施病蟲害綜合治理是發(fā)展無公害茶葉生產(chǎn)，確保茶葉優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)和可持續(xù)發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。微生物農(nóng)藥由于其高效安全無殘留不污染等特點，成為當今研究熱點。
　　 本研究利用實驗室從廈門地區(qū)茶園病害分離得到的多種常見病原真菌作指示菌，篩選出兩株

2、具有抗茶葉致病真菌活性的深海來源菌株，經(jīng)過鑒定一株為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）B5，一株為真菌淡紫擬青霉（Paecilomyces lilacinus）A65。通過平板對峙試驗探究了兩株菌對茶葉常見致病菌的抑制作用，防治效果均達到70％左右，具有較高制備成生防菌劑的潛力。
　　 為獲得大量菌劑有效成分，對兩株菌進行了發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選以及發(fā)酵條件的優(yōu)化。通過單因子法與正交設(shè)計法相結(jié)合得到B5最合適發(fā)酵培養(yǎng)基

3、配方為:可溶性淀粉5 g/L、酵母膏10 g/L、K2HPO410mM/L、NaNO35g/L，發(fā)酵所得到的發(fā)酵液中最大含菌量為3.12×109/mL。類似的方法得到A65的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基是馬鈴薯蛋白胨可溶性淀粉(PPS)培養(yǎng)基:新鮮土豆200g，水煮30min后，紗布過濾，濾液中加入5g/L蛋白胨，20g/L可溶性淀粉，0.5g/L Ca(NO3)2·4H2O，0.2g/L Na2HPO4·12H2O，發(fā)酵液中含孢量達到1.86×10

4、9/mL。進一步優(yōu)化兩株菌的搖瓶發(fā)酵工藝，B5適合接種1％的種子液、中性偏酸的發(fā)酵pH、培養(yǎng)溫度37℃、搖床轉(zhuǎn)速200r/min、裝液量為250mL中裝100mL。A65則適合接種3個菌塊，中性pH、培養(yǎng)溫度28℃、搖床轉(zhuǎn)速180r/min、裝液量為500mL中裝200mL。
　　 確定了兩株生防菌的可濕性粉劑配方，生防菌B5的可濕性粉劑配方為:Morwet EFW5％，Morwet D-4253％，羧甲基纖維素鈉0.5％，熒光