幾株昆蟲病原菌微菌核的誘導(dǎo)培養(yǎng)和條件優(yōu)化.pdf

1、蠐螬、蟋蟀、根蝽、白蟻等地下害蟲一生中大部分在土壤中生活,為害植物地下部或地面附近根莖部。現(xiàn)在對它們的防治一般采用化學(xué)農(nóng)藥,在用昆蟲病原真菌防治地下害蟲的研究中,布氏白僵菌防治蠐螬的報道較多,但由于地下害蟲常在土壤深層棲息,活動量小,一般在春秋季才向土表移動,且在旱作地區(qū)普遍發(fā)生,普通的孢子制劑可能因儲藏期或施放后無法適應(yīng)氣候環(huán)境的變化,而影響防治效果。因此需要一種耐干旱、易儲藏的繁殖體來防治地下害蟲。
　　本研究通過改變營養(yǎng)條件

2、在液體培養(yǎng)中人工誘導(dǎo)產(chǎn)生微菌核(Microsclerotia,以下簡稱MS),結(jié)果表明氮源種類的選擇決定是否產(chǎn)生MS,且不同菌種產(chǎn)MS的最佳氮源不盡相同,不添加吐溫-80對MS產(chǎn)生也無影響;通過一系列的單因素實驗,從球孢白僵菌、布氏白僵菌、金龜子綠僵菌共9個菌株中各篩選1株高產(chǎn)MS的菌株Bb2729、Bbr17和Ma55。其在碳含量32g/L時MS產(chǎn)量分別為3.87×103MS/mL、6.80×103MS/mL和4.07×103MS/m

3、L。
　　單因素實驗為基礎(chǔ),進行碳氮源用量比例復(fù)篩,發(fā)現(xiàn)MS產(chǎn)量和生物量均受碳源濃度和碳氮比共同作用,并通過對接種量等非營養(yǎng)條件的單因素實驗,確定進一步優(yōu)化方案。以碳濃度、碳氮比、搖床轉(zhuǎn)速、孢懸液接種量和培養(yǎng)液裝液量為五個因子,MS產(chǎn)量和生物量為響應(yīng)值,進行兩水平部分因子實驗,篩選顯著影響因子,結(jié)果Bb2729、Bbr17和Ma55三株菌的顯著因子均為碳濃度、碳氮比和接種量;最陡爬坡實驗確定響應(yīng)面的中心點,Bb2729:碳濃度27

4、g/L、碳氮比8:1、接種量0.9％,Bbr17:碳濃度30g/L、碳氮比7:1、接種量1.0%,Ma55:碳濃度30g/L、碳氮比35:1、接種量0.85%;Box-Benhnken中心復(fù)合實驗確定MS產(chǎn)量的理論最大值,其中布氏白僵菌Bbr17產(chǎn)量最高為8.24×103MS/mL(碳濃度27.07g/L、接種量0.84%、碳氮比7.29:1),其次是球孢白僵菌Bb2729:5.57×103MS/mL(碳濃度27.07g/L、接種量0.

5、84%、碳氮比7.29:1),金龜子綠僵菌Ma55:4.63×103MS/mL(碳濃度30.29g/L、接種量0.84%、碳氮比34.66:1);理論值條件下分別對各株菌進行三批次驗證試驗,結(jié)果與理論值相比均在1%誤差以內(nèi),說明了響應(yīng)面實驗結(jié)果的可信度。
　　MS的耐旱實驗,將三株真菌碳氮比復(fù)篩時各個實驗組得到的發(fā)酵產(chǎn)物,加硅藻土(diatomite,以下簡稱DE),抽濾凍干粉碎制成MS-DE粉末,在4℃冷藏條件下,4個月時復(fù)蘇率

6、仍維持在90%以上,低碳、高碳氮比發(fā)酵得到的MS復(fù)蘇率高達(dá)到100%。
　　MS-DE短期恒溫儲存試驗表明,溫度是影響MS儲藏期的重要因素,在4℃冷藏條件下,MS-DE復(fù)蘇率下降速度緩慢,60天后復(fù)蘇率仍維持在98%以上。在31℃條件下,MS-DE復(fù)蘇下降趨勢顯著增強,但均在也87%以上,相比之下布氏白僵菌
　　MS更耐儲藏,31℃儲藏60天復(fù)蘇率仍能達(dá)到91.93±1.58%。劑型化對MS復(fù)蘇率有一定影響,但的確有一定保護