冷脅迫下鐵皮石斛抗寒相關(guān)基因的克隆與表達(dá)研究.pdf

1、鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）是傳統(tǒng)名貴珍稀中藥材，具有益胃生津、滋陰清熱等獨(dú)特功效。因過度采挖、生存環(huán)境破壞，野生鐵皮石斛資源基本枯竭。21世紀(jì)以來，鐵皮石斛人工栽培取得了突破性進(jìn)展，而其抗寒性是制約人工栽培特別是原生態(tài)栽培的主要瓶頸。研究鐵皮石斛抗寒的分子機(jī)制是抗寒品種選育的基礎(chǔ)，本文進(jìn)行了冷脅迫下鐵皮石斛抗寒相關(guān)基因的克隆與表達(dá)研究，取得了如下研究結(jié)果：
　　 ⑴通過冷

2、脅迫下葉片相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定和葉片保護(hù)酶的活性大小判定5個(gè)家系鐵皮石斛的抗寒能力，結(jié)果表明:通過葉片保護(hù)酶確定的鐵皮石斛的抗寒能力與葉片相對(duì)電導(dǎo)率計(jì)算出的半致死溫度確定的抗寒順序一致，順序?yàn)?E＞D＞C＞B＞A。
　　 ⑵綜合常用的RNA提取方法，建立并優(yōu)化了CTAB+LiCl+RNAiso Plus鐵皮石斛RNA提取方法，獲得了能夠滿足后續(xù)分子實(shí)驗(yàn)要求的鐵皮石斛RNA，并為其他多糖類中藥材的總RNA提取提供了有益的借鑒和參考。<

3、br>　　 ⑶通過鐵皮石斛進(jìn)行冷脅迫下SCoT差異顯示研究，獲得11個(gè)差異表達(dá)片段，分別與膜相關(guān)蛋白、滲透調(diào)節(jié)蛋白、轉(zhuǎn)錄因子、抗逆性蛋白有很高的同源性，還有兩個(gè)基因片段功能未知，可能與鐵皮石斛的抗寒有關(guān)。
　　 ⑷利用其他物種中Actin基因的保守序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，采用RACE技術(shù)從鐵皮石斛中成功克隆到了Actin的全長(zhǎng)cDNA序列。鐵皮石斛Actin與其它植物的Actin基因無(wú)論是其核苷酸序列還是編碼的氨基酸序列都具有高度的