脊尾白蝦微衛(wèi)星引物篩選及群體遺傳多樣性分析.pdf

1、采用人工合成的生物素標記(AG)15探針及磁珠富集法構建了海州灣脊尾白蝦(Exopalaemon carinicauda)基因組微衛(wèi)星富集文庫。將脊尾白蝦基因組DNA經HaeⅢ酶切后,收集400～1200bp片段,連接特定接頭,與生物素標記(AG)15探針雜交并捕獲含有微衛(wèi)星的DNA片段,然后連接到pMD18-T載體中,構建脊尾白蝦微衛(wèi)星富集文庫。隨機挑取947個克隆,經菌落PCR檢驗,其中667個為陽性克隆。從陽性克隆中隨機選取184

2、個克隆進行測序,有150個克隆含有微衛(wèi)星序列,共獲得199個微衛(wèi)星序列,其中完美型158個(79.4％),非完美型27個(13.6％),復合型14個(7.0％)。根據微衛(wèi)星序列,設計了119對微衛(wèi)星引物,64對擴增出穩(wěn)定的具有特異性的條帶,經30個脊尾白蝦個體進行多樣性評價后,有26個位點表現(xiàn)出多態(tài)性。26個微衛(wèi)星位點獲得的等位基因數從3～16個不等,平均每個位點擴增得到6.5個等位基因。觀測雜合度(Ho)、期望雜合度(He)及多態(tài)性信

3、息含量值(PIC)的范圍分別為0.111～0.929、0.246～0.932、0.231～0.909。本研究開發(fā)的微衛(wèi)星位點將為脊尾白蝦種群多樣性研究、家系識別和種質鑒定提供有效的工具。
　　采用人工合成的生物素標記(AG)15和(AC)15探針及磁珠富集法構建了萊州灣脊尾白蝦(Exopalaemon carinicauda)基因組微衛(wèi)星富集文庫。將脊尾白蝦基因組DNA經HaeⅢ酶切后,收集400～1200bp片段,連接特定接頭,

4、與生物素標記(AG)15和(AC)15探針雜交并捕獲含有微衛(wèi)星的DNA片段,然后連接到pMD18-T載體中,構建萊州灣脊尾白蝦微衛(wèi)星富集文庫。根據微衛(wèi)星序列,設計微衛(wèi)星引物,經30個脊尾白蝦個體進行多樣性評價后,有30個位點表現(xiàn)出多態(tài)性。30個微衛(wèi)星位點獲得的等位基因數從2～14個不等。觀測雜合度(Ho)、期望雜合度(He)及多態(tài)性信息含量值(PIC)的范圍分別為0.2299～0.9228、0.1000～0.8000、0.2002～0.

5、8939。本研究開發(fā)的微衛(wèi)星位點將為萊州灣脊尾白蝦種群多樣性和種群結構研究提供基礎的數據。
　　利用12對微衛(wèi)星標記分析了萊州灣(LZ)、海州灣(HZ)、象山(XS)脊尾白蝦野生群體的遺傳多樣性。12個位點在3個群體中均表現(xiàn)出高度的多態(tài)性。12個微衛(wèi)星位點共得到115個等位基因,各個位點的等位基因數介于6-14之間,平均每個位點上的等位基因數為9.5833個;各個位點的平均期望雜合度(He)、平均觀測雜合度(Ho)、平均多態(tài)信息含