不同環(huán)境條件下鈍裂銀蓮花(Anemone obtusiloba)的ISSR遺傳多樣性分析.pdf

1、鈍裂銀蓮花(Anemone obtusiloba)為毛莨科(Ranunculaceae)毛莨亞科銀蓮花屬(Anemone L)中的一種多年生草本植物，單花頂生，一般產(chǎn)生1-3個(gè)獨(dú)立花莖，花小(1-2cm)，花色有黃色、淺黃色和白色三種。目前對(duì)鈍裂銀蓮花的研究主要集中在其藥用價(jià)值、性分配和繁殖分配等方面。本研究結(jié)合具體的研究條件，采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行鈍裂銀蓮花遺傳多樣性水平和遺傳分化程度的研究，研究結(jié)果如下：
　　 1.在

2、利用ISSR技術(shù)研究鈍裂銀蓮花遺傳多樣性過程中，從引物篩選，擴(kuò)增條件，檢測方法等幾個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)化，建立鈍裂銀蓮花ISSR最適合的反應(yīng)體系為：20μl的PCR反應(yīng)體系，含有DNA模板40ng，Mg2+1.2mmol/L，10xPCR Buffer 2μl，dNTPs 0.3mmol/L，引物0.3mmol/L和6UTaq DNA聚合酶。ISSR-PCR的反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，引物退火45s，72℃延伸90s，循

3、環(huán)35次；72℃延伸7min，4℃保存。在此優(yōu)化條件下，可以得到重復(fù)性好，穩(wěn)定且多態(tài)性高的ISSR條帶。
　　 2.從40對(duì)ISSR引物中篩選出13條多態(tài)性ISSR引物，13條引物共擴(kuò)增了4個(gè)地域的11個(gè)居群共220個(gè)個(gè)體，共擴(kuò)增出701條帶，其中392條具有多態(tài)性，多態(tài)性位點(diǎn)百分率為55.92％，每條引物擴(kuò)增出的條帶數(shù)為39-73條，平均每條引物擴(kuò)增的條帶數(shù)為53.92條，擴(kuò)增條帶在300bp-1200bp之間。鈍裂銀蓮花居群

4、內(nèi)的多態(tài)性位點(diǎn)百分率在27.8％-54.1％之間，平均為42.4％。每個(gè)位點(diǎn)的平均有效等位基因數(shù)為1.1673。Nei’s基因多樣性在居群水平上為0.0578-0.1699之間，平均值為0.1135，在物種水平上為0.2497；shannon信息指數(shù)在物種水平上為0.1000-0.2632之間，平均值為0.1830,在物種水平上為0.3719。
　　 3.通過Popgene1.32軟件分析，鈍裂銀蓮花所有群體的基因多樣度(Ht)

5、為0.2551，居群內(nèi)的基因多樣度(Hs)為0.1173，居群間的基因多樣度為0.1378，遺傳分化系數(shù)(Gst)為0.5010,居群間的基因流(Nm)的估測值為每代群體間平均為0.5243。不同環(huán)境條件下居群間遺傳分化系數(shù)隨著海拔的升高而升高，而基因流隨海拔的升高而降低。用AMOVA分析結(jié)果顯示：居群間的變異百分率為38％，居群內(nèi)的變異百分率為62％。即在遺傳變異中有38％的變異發(fā)生在居群內(nèi)，有62％的變異發(fā)生在居群間，居群內(nèi)和居群間

6、的差異均極顯著(P<0.001)。
　　 4.由NTSYS軟件得到，鈍裂銀蓮花居群間遺傳相似系數(shù)的變化范圍為0.569-0.917，所有群體間的平均遺傳相似系數(shù)為0.7027。居群間的遺傳距離(GD)變幅為0.0862-0.5642，平均為0.3656。相同環(huán)境條件下，鈍裂銀蓮花的遺傳相似性變幅小，不同環(huán)境條件下，鈍裂銀蓮花的遺傳相似變幅較大。以遺傳相似系數(shù)0.73為基準(zhǔn)，11個(gè)材料聚為3類，第一類為合作鈍裂銀蓮花，碌曲和阿萬倉