河北省不同地區(qū)杠柳遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、杠柳(Periploca sepium Bge)為蘿藦科杠柳屬植物，耐性好，具有廣泛的適應(yīng)性。是優(yōu)良的固沙、水土保持、邊坡綠化和煤矸石山生態(tài)恢復(fù)樹種，也是我國傳統(tǒng)中藥材。隨著杠柳藥理作用以及生態(tài)效益的不斷開發(fā)，市場需求增加，使得杠柳出現(xiàn)過度采挖，但其種苗繁育遲緩，貨源少，進(jìn)一步開展資源保護(hù)利用及人工培植工作困難重重。我國杠柳分布廣泛，但是對杠柳分子水平研究非常缺乏，多集中于生理藥理研究。本研究以河北省不同地理位置生長的杠柳為研究材料，利

2、用ISSR分子標(biāo)記方法對其遺傳多樣性進(jìn)行研究，主要研究結(jié)果如下:
　　1.本試驗分別采用改良CTAB法、SDS法、試劑盒提取杠柳葉片DNA，通過濃度以及純度檢測，結(jié)合電泳圖譜，確定了適用于杠柳ISSR分析的基因組DNA提取方法為改良CTAB法。
　　2.從100條由哥倫比亞大學(xué)公布的ISSR通用引物中篩選出43條有擴(kuò)增產(chǎn)物的引物，對隨機(jī)選取的杠柳樣本進(jìn)行檢驗，進(jìn)一步篩選條多態(tài)性高、穩(wěn)定性好的引物，通過檢測，34條引物具有多態(tài)

3、性，其中多態(tài)性高效率引物8條。利用8條高效ISSR引物對11個不同地區(qū)的杠柳樣本進(jìn)行PCR檢測，共檢測到位點79個，其中多態(tài)性位點63個，占79.7％。
　　3.通過對引物濃度、模板DNA濃度、退火溫度、循環(huán)次數(shù)等因素的研究，建立了適合杠柳基因組的ISSR反應(yīng)體系:總反應(yīng)體積25μL，其中Taq MasterMix，12.5μL，模板DNA1μL，正向引物和反向引物各1μL，ddH2O9.5μL。
　　4.利用NTSYS-p

4、e2.10e軟件計算供試材料間的遺傳相似系數(shù)，得相似性矩陣。遺傳相似系數(shù)(GS)可以揭示不同地區(qū)種質(zhì)間彼此遺傳關(guān)系遠(yuǎn)近，GS值越大說明材料間親緣關(guān)系越近;GS值越小表明親緣關(guān)系越遠(yuǎn)。11個不同地區(qū)供試樣品遺傳相似系數(shù)變化范圍在0.3545～0.8545，其中供試樣品6與9親緣關(guān)系最近，遺傳相似性系數(shù)高達(dá)0.8545，供試樣品6與10親緣關(guān)系最遠(yuǎn)，遺傳相似性系數(shù)僅為0.3545。結(jié)果表明，不同地區(qū)杠柳種質(zhì)資源遺傳差異比較顯著。
　　

5、5.利用NTSYS-pc2.10e軟件對11份供試樣品進(jìn)行UPGMA聚類分析，通過Treeplot模塊生成聚類分析樹狀圖。11個不同地區(qū)種質(zhì)材料在相似系數(shù)為0.60水平上分為三大類，第Ⅰ類為來自石家莊贊皇、邢臺內(nèi)丘、沙河、邯鄲涉縣和武安的樣品。第Ⅱ類共包括5份種質(zhì)，分別來自于保定易縣、滿城、阜平、淶水、淶源。來自張家口的樣品作為單獨一支為第Ⅲ類。由此可見，杠柳種質(zhì)親緣關(guān)系與地理分布呈一定相關(guān)性，其生長區(qū)域越近其親緣關(guān)系越近，充分體現(xiàn)了地