中華鱉不同地理群體遺傳多樣性研究.pdf

1、中華鱉(Trionyxsinensis)是我國重要的特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之一，其營養(yǎng)豐富，富含蛋白質(zhì)、鮮味氨基酸(谷氨酸和天門冬氨酸)、不飽和脂肪酸、鐵、鋅及鉻等多種礦物質(zhì)微量元素，近幾年其養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展備受關(guān)注。目前，我國一些省市已相繼建立了中華鱉原種、良種場，啟動(dòng)了中華鱉種質(zhì)資源的保護(hù)以及良種選育工作，但由于長達(dá)二十多年來的苗種盲目引進(jìn)以及管理不善，致使中華鱉種質(zhì)資源存在一定程度上的混雜，中華鱉養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展受到了一定的限制。為保證中華鱉養(yǎng)殖業(yè)的

2、長遠(yuǎn)發(fā)展，對(duì)各地區(qū)的鱉種遺傳多樣性進(jìn)行檢測(cè)評(píng)價(jià)，為良種選育工作提供遺傳背景知識(shí)及理論參考，具有重要的意義。
　　 本研究首次根據(jù)NCBI上提交的中華鱉線粒體DNA序列，設(shè)計(jì)了擴(kuò)增進(jìn)化速率較快的D-LOOP區(qū)(D環(huán))部分序列的引物，采用SSCP技術(shù)結(jié)合測(cè)序結(jié)果，探討中華鱉不同地理群體線粒體基因D-LOOP區(qū)變異度和遺傳多樣性。同時(shí)，本研究對(duì)日本群體♀×黃河群體()的雜交子代與親本子代之間的遺傳關(guān)系展開實(shí)驗(yàn)，從分子水平探討了雜交對(duì)中

3、華鱉遺傳多樣性的影響。其研究結(jié)果如下：
　　 (1)采用PCR結(jié)合DNA測(cè)序技術(shù)和SSCP技術(shù)，以日本群體、黃河群體、黃沙鱉群體3個(gè)中華鱉地理群體為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，結(jié)果顯示：在25個(gè)個(gè)體中，其堿基組成為A+T的平均含鼉(65.4％)高于G+C(34.6％)，共檢測(cè)到變異位點(diǎn)7個(gè)(約占總位點(diǎn)數(shù)的5.7％)，轉(zhuǎn)換/顛換值為2.76。3個(gè)地理群體核苷酸多樣性(x)為0.01995，平均核苷酸差異數(shù)(K)為2.453；單倍型多樣度最高的是日本

4、群體(0.80000)，最低的是黃河群體(0.29487)，核苷酸多樣性指數(shù)最高的是日本群體，為0.02219，最低的為黃河群體，為0.00709，日本群體的遺傳多樣性比黃河群體和黃沙鱉群體豐富。黃沙鱉群體與日本群體、黃河群體的遺傳距離較遠(yuǎn)，分別為0.032和0.035。25個(gè)個(gè)體分屬6個(gè)單倍型，單倍型多樣度(Hd)為0.707，單倍型間的平均遺傳距離(P)為0.027；6個(gè)單倍型構(gòu)建的UPGMA系統(tǒng)樹聚為3個(gè)分支。PCR-SSCP分析

5、，可以檢測(cè)到兩種類型的電泳圖譜，其中Ⅱ型均為日本群體。由上述結(jié)果可知，中華鱉群體mtDNAD環(huán)序列存在著較豐富的變異和遺傳多樣性。結(jié)合測(cè)序結(jié)果，推測(cè)PCR-SSCP技術(shù)可用于78位T→←A顛換變異位點(diǎn)的檢測(cè)。
　　 (2)采用RAPD技術(shù)，以太湖群體為外群參照，對(duì)日本群體♀×黃河群體()的雜交子代進(jìn)行遺傳多樣性分析。實(shí)驗(yàn)從45個(gè)隨機(jī)引物中篩選出22個(gè)擴(kuò)增較好的引物，在日本群體♀×黃河群體()的雜交子代、日本群體子代、黃河群體子代

6、和太湖群體4個(gè)群體中共擴(kuò)增出176個(gè)位點(diǎn)，其中129條(73.30％)呈現(xiàn)多態(tài)性，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出了8條，擴(kuò)增出的片段分子量在300-2500bp之間。多態(tài)位點(diǎn)比例、Nei基因多樣性指數(shù)以及Shannon信息指數(shù)大小順序?yàn)椋弘s交群體>日本群體>黃河群體>太湖群體，雜交子代比親本子代的的遺傳多樣性更豐富。4個(gè)群體兩兩之間的遺傳相似性指數(shù)在0.8351-0.9544之間，遺傳距離在0.0467-0.1802之間，雜交鱉子代與親本黃河群體子