柑橘半穿刺線蟲不同地理種群形態(tài)學、遺傳多樣性研究及分子檢測.pdf

1、柑橘半穿刺線蟲(Tylenchulus semipenetrans)引起柑橘慢衰病(citrus slow decline disease)是重要的柑橘病害線蟲，廣泛分布于世界柑橘產區(qū)。柑橘半穿刺線蟲在我國廣泛分布，危害嚴重。本研究對不同地理群體的柑橘半穿刺線蟲從形態(tài)學、交叉接種寄生性到分子生物學幾個方面進行了比較和分析，并建立了柑橘半穿刺線蟲特異性檢測技術。
　　 對我國4個省，寄主分別為杉木、柑橘5個地理群體柑橘半穿刺線蟲的

2、形態(tài)學進行了顯微觀測。各種群測量值與前人測量數(shù)據(jù)基本一致，表明柑橘半穿刺線蟲種群間蟲體形態(tài)保守；所有群體中均有發(fā)現(xiàn)近末端鈍圓，呈棍狀，表面呈縊縮狀類型。
　　 通過室內、野外交叉接種發(fā)現(xiàn)，杉木林地的柑橘半穿刺線蟲種群可侵染杉木苗根系，但未能侵染柑橘苗根系；柑橘地的柑橘半穿刺線蟲可侵染柑橘根系，但未侵染杉木根系，這與前人的結果不一致。
　　 首次對采自我國4個省份柑橘或杉木上27個柑橘半穿刺線蟲種群的rDNA-ITS進行測

3、序，提交GenBank，獲得序列號，豐富了柑橘半穿刺線蟲的核酸數(shù)據(jù)庫；經(jīng)過對我國4個省的27個柑橘半穿刺線蟲種群的rDNA-ITS區(qū)進行測序和比對分析，結果表明：我國不同地區(qū)的柑橘半穿刺線蟲的rDNA-ITS序列保守，差異極小，線蟲種群間的序列相似性在98.4[％]以上，序列變異率為0～1.6[％]，序列多態(tài)性分析表明序列特征上存在差異，具有豐富的多樣性；根據(jù)序列相似度與系統(tǒng)進化樹顯示我國柑橘半穿刺線蟲的ITS序列與地理位置及寄主無相關

4、性。寄生于杉木或柑橘的柑橘半穿刺線蟲種群之間并不能通過rDNA-ITS序列區(qū)分是否存在生理小種。
　　 本研究根據(jù)柑橘半穿刺線蟲的rDNA-ITS的序列特征，設計出了一對柑橘半穿刺線蟲特異性引物，Ts-SF(正向：5’-TACCAGGTTGAGCAGAGTTCTT-3’)和Ts-SR (反向：5’-TCCTACCCTTCCACAGCG-3’)。特異性引物靈敏度高，可擴增出單條柑橘半穿刺線蟲二齡線蟲的DNA；特異性強及可靠性好，對