2010~2011年我國部分省區(qū)PRRS分離鑒定及分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種以妊娠母豬繁殖障礙和仔豬呼吸系統(tǒng)疾病為特征的高死亡率的傳染病。本病的流行給全球養(yǎng)豬行業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失，特別是我國2006年發(fā)生的高致病性PRRS，由于其變異程度較大，造成豬群大批量死亡，并使疫苗的研發(fā)工作受到巨大的挑戰(zhàn)。PRRSV屬于尼多病毒目，動脈炎病毒科，基因組全長約為15kb，含有9個開放閱讀框(ORF)。
　　 本研究分別對2010年全國

2、10個省1375份和2011年12個省1707份生豬屠宰場組織樣品進行PRRS檢測，其中陽性率分別為28.7％和16.75％。通過檢測分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)2011年樣品陽性率比2010年有所下降，檢測結(jié)果為陽性的樣品大多數(shù)屬于變異株P(guān)RRS。通過對我國部分省市的PRRS流行情況進行分析比對，了解PRRS在時空上的分布及感染情況，并通過分析PRRSV變異情況，初步掌握目前PRRS遺傳變異特點及流行規(guī)律。
　　 本研究應(yīng)用Mcar-145細

3、胞分離得到15株P(guān)RRSV，對15株P(guān)RRSV進行電子顯微鏡觀察、間接免疫熒光試驗(IFA)和TCID50的測定進一步確定成功分離到PRRSV。依據(jù)NCBI所下載的標(biāo)準(zhǔn)序列設(shè)計一對引物，對ORF5全長進行擴增(603bp)，分離株之間的核苷酸同源性為98.8～99.9％，核苷酸推導(dǎo)的氨基酸同源性為95.5％～99.5％。15株P(guān)RRSV分離株與美洲型的PRRSV同源性較高，可推斷均屬美洲型，其中9株ORF5(151)氨基酸位點發(fā)生與HB

4、-1相同的變異，即R151→K151，其余6株ORF5(151)氨基酸位點與JAX1相同，即ORF5(151)為R。系統(tǒng)進化樹表明，15個分離株與HUB1和JXA1親緣關(guān)系比較近，處于第四亞群，而BFLN3-2010、BFAH2-2011、BFSD1-2011與JXA1遺傳距離相對較遠。
　　 本研究對分離得到的BFLN2-2010進行全基因組序列測定，其基因組全長15320bp。BFLN2-2010分離株Nsp2基因全長為28

5、50bp，編碼950個氨基酸，Nsp2基因推導(dǎo)氨基酸出現(xiàn)兩處核苷酸缺失，其中一處發(fā)生在Nsp2蛋白的482位處的單一缺失，另一處發(fā)生在533～561位之間29個氨基酸的連續(xù)缺失，總計30個氨基酸缺失，這與2006年以后分離的高致病性PRRS，如JXA1、HUB1等具有相似的核苷酸序列缺失特征。BFLN2-2010分離株與LV的同源性為61.4％，與VR-2332同源性為89.1％，表明BFLN2-2010分離株為美洲型毒株。全基因系統(tǒng)進