我國(guó)部分省區(qū)豬源多殺性巴氏桿菌的分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida，Pm）是常見(jiàn)的共生菌或機(jī)會(huì)性病原菌，該菌宿主范圍廣，通常能在大多數(shù)畜禽以及野生動(dòng)物的上呼吸道分離到。就畜牧養(yǎng)殖業(yè)而言，該菌可引發(fā)豬肺疫、禽霍亂、牛出血性敗血癥、兔出血性敗血癥等，給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。此外，Pm也是一種人獸共患病原菌。人發(fā)生本病后，主要表現(xiàn)為傷口感染。
　　Pm依據(jù)莢膜抗原、菌體抗原、脂多糖抗原的差異，可分為多個(gè)血清型，各血清型之間多數(shù)無(wú)交叉免疫

2、原性。另外，特定的疾病往往與Pm特定的血清型相關(guān)。按照莢膜分型法，禽霍亂、豬肺疫常與Pm A型菌株相關(guān);而按照赫德?tīng)査诡D脂多糖分型法，引起禽霍亂的菌株其脂多糖血清型常為Pm1型和3型。然而，這些特定血清型與宿主疾病相關(guān)性的分子和細(xì)胞基礎(chǔ)，至今仍不清楚。
　　本研究對(duì)我國(guó)14個(gè)省份與豬肺炎相關(guān)的Pm進(jìn)行了分離與鑒定。通過(guò)莢膜多重PCR、脂多糖多重PCR、毒力基因的檢測(cè)、多位點(diǎn)序列分型等方法，對(duì)所分離的菌株進(jìn)行研究，旨在了解此類菌株的

3、流行情況以及分子特征，為防控巴氏桿菌病奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.豬源Pm的分離鑒定
　　2015年～2016年從我國(guó)14省份的1597份臨床豬肺炎肺臟中共分離115株P(guān)m，分離率為7.2％。對(duì)所分離菌株進(jìn)行莢膜多重PCR分型，其中A型57(50％)株，D型53(46％)株，未定型5(4％)株。
　　2.豬源Pm的脂多糖分型
　　對(duì)所分離的115株P(guān)m進(jìn)行脂多糖多重PCR分型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有菌株均能定型。

4、而脂多糖型僅有L3和L6兩種，其中L3型26株，占23％，L6型89株，占77％。我們把莢膜血清型與脂多糖基因型進(jìn)行組合后，發(fā)現(xiàn)莢膜D型菌株僅與脂多糖L6型相對(duì)應(yīng)。
　　3.豬源Pm毒力基因分布
　　應(yīng)用PCR對(duì)115株P(guān)m的23個(gè)毒力基因進(jìn)行檢測(cè)，并分析這些毒力基因的分布情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中一些毒力基因總的檢出率為100％，這些基因包括黏附因子相關(guān)基因ptfA、fimA、hsf-2;鐵攝取相關(guān)基因exbB、exbD、tonB

5、;外膜蛋白基因opmA、ompH、omp87;超氧化物歧化酶相關(guān)基因sodA、sodC。也有一些毒力基因總的檢出率很低，如轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白基因tbpA，檢出率為0，又如PMT毒素基因toxA，檢出率為2.6％。在不同型（莢膜血清型、脂多糖基因型、莢膜:脂多糖組合型）的菌株間一些毒力基因的檢出率有較大的差別。以莢膜分型為例，pfhA、tadD、pmHAS、hgbA基因在A型菌株中的檢出率顯著高于D型菌株中的檢出率(P＜0.05)，而hsf-1

6、、hgbB基因在D型菌株中的檢出率顯著高于A型菌株中的檢出率(P＜0.05)。同樣的，以脂多糖分型為例，pfhA、tadD、pmHAS、hgbA、nanH基因在L3型菌株中的檢出率顯著高于L6型菌株中的檢出率(P＜0.05)，而hgbB、nanB基因在L6型菌株中的檢出率顯著高于L3型菌株中的檢出率(P＜0.05)。通過(guò)進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析莢膜:脂多糖組合型間毒力基因的差異，首次發(fā)現(xiàn)pfhA等基因的檢出率可能與莢膜型無(wú)關(guān)，而和脂多糖型相關(guān)。<

7、br>　　4.豬源Pm的MLST研究
　　本研究對(duì)我國(guó)不同省份的23株P(guān)m分離株進(jìn)行MLST分型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了ST3、ST10、ST11三個(gè)ST型。而在湖北、廣東等多個(gè)省份，豬源Pm不止一個(gè)ST型。ST11序列類型的菌株在我國(guó)七個(gè)省份均有分離到，表明了該類型菌株在我國(guó)分布的廣泛性。因此，需要加強(qiáng)對(duì)此類型菌株的流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和防控。本研究中從山西、湖北、廣東分離的3株產(chǎn)毒素Pm都屬于ST11型，而本實(shí)驗(yàn)室先前保存的8株產(chǎn)毒素Pm也屬于S