SFRS18對脂肪細(xì)胞分化與PPARγ對豬IMF含量影響的研究.pdf

1、肌內(nèi)脂肪含量是影響豬肉品質(zhì)的關(guān)鍵因素，提高肌內(nèi)脂肪含量是改善豬肉品質(zhì)的有效途徑。而對于脂肪沉積的研究關(guān)鍵是找到特異性調(diào)控前體脂肪細(xì)胞分化生長的基因，及特異性調(diào)控肌內(nèi)脂肪形成的基因型。為豬脂肪沉積，肌內(nèi)脂肪含量選育提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
　　 實驗一通過“天花板”法成功培養(yǎng)了脂肪組織和肌肉組織的成熟脂肪細(xì)胞。在建立細(xì)胞系基礎(chǔ)上，設(shè)計合成三對靶向豬SFRS18基因的shRNA，將SFRS18-shRNA的表達(dá)載體瞬時轉(zhuǎn)染前體脂肪細(xì)

2、胞，結(jié)果成功地抑制了細(xì)胞中SFRS18的表達(dá)，下調(diào)效果顯著（達(dá)60％，p＜0.05）。成脂誘導(dǎo)后，油紅O染色顯示與對照組比較干擾組細(xì)胞聚集脂滴能力下降。熒光定量PCR的結(jié)果顯示，干擾SFRS18表達(dá)后，細(xì)胞中分化標(biāo)志基因FABP4表達(dá)量與對照組相比也顯著下降(p＜0.05)。初步驗證了SFRS18基因可調(diào)控前體脂肪細(xì)胞分化。
　　 實驗二采用測序及PCR-SSCP技術(shù)對PPARγ基因調(diào)控區(qū)域進(jìn)行多態(tài)性檢測、分型，發(fā)現(xiàn)PPARγ基

3、因調(diào)控區(qū)-1640 bp(T/C)和-1564bp（A/G）兩處多態(tài)位點，且這兩個位點為連鎖的單倍型。在二花臉群體中檢測到TA、GC、TA/GC三種基因型，而在二元豬中發(fā)現(xiàn)GC、TA/GC兩種基因型。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)三種不同基因型個體的PPARγ表達(dá)量存在顯著差異，其中雜合子表達(dá)量最高，其次TA型高于GC型。為了驗證調(diào)控區(qū)域的基因位點突變對PPARγ基因的調(diào)控作用，擴(kuò)增包含突變位點的兩種PPARγ上游序列，將其連入pGL3質(zhì)粒，構(gòu)建了兩種熒光