PAEs對原代培養(yǎng)的大鼠脂肪細胞PPAR-γ2表達的影響.pdf

1、環(huán)境是人類生存和發(fā)展的物質基礎,然而隨著現(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展,許多人工合成的有毒有機物質通過各種途徑進入人體,并在人體內蓄積,對人體造成持久性的危害。鄰苯二甲酸酯類化合物(PAEs)就是一種全球性的環(huán)境污染物,能夠干擾人體生殖發(fā)育的多個環(huán)節(jié),同時還具有致癌作用。最近研究發(fā)現(xiàn),PAEs在人體內的蓄積量達到了一個很高的含量,這些研究還提示了雖然地域不同,但PAEs對人類的潛在危害是很危險的。還有研究表明,PAEs還可能與人體肥胖有關,由于PAEs

2、蓄積在脂肪組織中,那么PAEs對人類的危害很可能超過了我們之前評估的程度。因此,有必要對PAEs與肥胖的關系進行全方位的研究。本研究建立了大鼠脂肪細胞原代培養(yǎng)模型,利用PAEs染毒大鼠脂肪細胞,通過觀察脂肪細胞的形態(tài)、脂肪顆粒和相關mRNA等多方面的變化,分析PAEs對大鼠脂肪細胞的影響,為研究PAEs與肥胖的關系提供科學依據(jù)。本研究主要內容包括：
　　 ⑴建立大鼠脂肪細胞原代培養(yǎng)模型。斷頸處死大鼠,提取大鼠脂肪組織,用消化酶消

3、化脂肪組織,脂肪組織懸液通過不銹鋼細胞篩過濾,離心之后取沉淀,用無血清基礎培養(yǎng)液重懸細胞,對脂肪細胞進行培養(yǎng),觀察脂肪細胞的變化以確定大鼠脂肪細胞原代培養(yǎng)的合適條件。實驗結果表明,大鼠原代培養(yǎng)的合適條件是取大鼠腹股溝及附睪處脂肪組織、Ⅰ型膠原酶消化、消化時間為90min、用200目孔徑的細胞篩過濾、1000rpm的轉速離心兩次取沉淀重懸細胞。
　　 ⑵對脂肪細胞進行PAEs染毒培養(yǎng),觀察脂肪細胞多方面的變化,從而評價PAEs對脂

4、肪細胞的影響。主要實驗：①顯微鏡每天觀察脂肪細胞的形態(tài)變化;②油紅O對脂肪細胞進行染色,觀察脂肪細胞中脂肪顆粒的變化;③油紅O染色提取法和MTT比色法檢查脂肪細胞的生長狀況;④提取脂肪細胞的總RNA,通過逆轉錄PCR實驗,分析過氧化物酶體增殖劑受體γ2(PPAR-γ2)mRNA的表達情況,PPAR-γ2與脂肪細胞生長密切相關。實驗結果表明,①通過顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),PAEs處理過的脂肪細胞由最初的小圓形變化為梭形最后變成橢圓形,隨著培養(yǎng)時間

5、的增加,大鼠脂肪細胞內開始出現(xiàn)脂肪顆粒,并逐漸增加,最后部分脂肪顆粒融合為較大的脂肪顆粒,符合脂肪細胞的發(fā)育規(guī)律。②通過油紅O染色,證實了在PAEs處理過的大鼠脂肪細胞中有脂肪顆粒的產(chǎn)生。③通過油紅O染色提取法和MTT比色法,發(fā)現(xiàn)隨著培養(yǎng)液中PAEs濃度的增加,大鼠脂肪細胞產(chǎn)生的脂肪顆粒數(shù)量增多。④通過逆轉錄PCR,發(fā)現(xiàn)PPAR-γ2的表達隨著PAEs濃度的增加而增加。
　　 ⑶研究表明：PAEs對脂肪細胞的影響表現(xiàn)為成熟脂肪細