泡球蚴囊液對原代培養(yǎng)大鼠肝細胞增殖影響的初步研究.pdf

1、目的: 1.成功建立大鼠肝細胞的無血清原代培養(yǎng)體系。2.探討泡球蚴囊液對體外無血清原代培養(yǎng)大鼠肝臟細胞增殖的影響。 方法:1.以Wistar大鼠作肝細胞供者，采用膠原酶肝臟原位灌流消化法分離大鼠肝細胞，并以1×106的密度接種于Ⅰ型膠原鋪底的直徑35mm的培養(yǎng)皿，分別采用血清和無血清培養(yǎng)24h和48h，并在肝細胞形態(tài)學(xué)和肝細胞增殖指數(shù)上對兩者進行比較，建立大鼠肝細胞無血清原代培養(yǎng)體系。2.大鼠肝細胞無血清培養(yǎng)體系建立后，分別用無

2、菌的泡球蚴囊液及無血清培養(yǎng)液與大鼠肝細胞共培養(yǎng)24h和48h，培養(yǎng)期間用熒光倒置顯微鏡觀察大鼠肝細胞的形態(tài)學(xué)改變，用流式細胞儀測定大鼠肝細胞的細胞周期；同時將分離所得的大鼠肝細胞以1×105的密度接種于Ⅰ型膠原鋪底的96孔培養(yǎng)板，無血清培養(yǎng)后，采用MTT法檢測泡球蚴囊液對大鼠肝臟細胞是否有毒性作用。 結(jié)果: 1.大鼠肝細胞無血清培養(yǎng)體系的建立：大鼠肝細胞活細胞分離存活率＞90％，與血清原代培養(yǎng)的肝細胞相比，無血清原代培養(yǎng)的肝細胞

3、生長良好，24h和48h肝細胞增殖指數(shù)略微增加，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。2.與對照組相比，與泡球蚴囊液共培養(yǎng)的肝細胞貼壁生長良好；MTT法顯示泡球蚴囊液對肝細胞無細胞毒性作用；泡球蚴囊液處理24小時后肝細胞增殖指數(shù)(PI)由82.0％±6.0％降至49.35％±4.0％；處理48小時后肝細胞增殖指數(shù)(PI)由67％±10％降低至27.61％±6％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論: 1.成功建立大鼠肝細胞無血清