乙醇對(duì)原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)及細(xì)胞活性的影響.pdf

1、背景與目的：
　　現(xiàn)如今，“酒”已經(jīng)成為人們?nèi)粘Ｉ钪斜夭豢缮俚囊环N“飲料”，甚至發(fā)展成為一種文化。酒其主要成分是乙醇，而乙醇是一種在體內(nèi)可自由擴(kuò)散且氧化、代謝緩慢的物質(zhì)，對(duì)人體許多系統(tǒng)臟器均有損傷作用，且能輕易地通過血腦屏障，導(dǎo)致大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。在我國(guó)，由于人們生活水平的不斷提高，并受我國(guó)傳統(tǒng)飲酒文化的影響，以及“酒”在社會(huì)人際交流中的作用，乙醇濫用、乙醇中毒現(xiàn)象呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，并呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)。而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，海馬神經(jīng)

2、元對(duì)乙醇損傷的敏感性比較高，可引起海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和功能的改變，造成學(xué)習(xí)記憶認(rèn)知功能的損害。本研究主要是通過體外培養(yǎng)原代大鼠海馬神經(jīng)元，觀察在不同濃度乙醇的作用下，其形態(tài)學(xué)和細(xì)胞活性發(fā)生的變化，為進(jìn)一步探究乙醇對(duì)神經(jīng)元損傷的作用機(jī)制提供一定的依據(jù)。
　　方法：
　　從實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的24h出生的SD大鼠乳鼠，分離出海馬神經(jīng)元，在體外無血清培養(yǎng)至第7天，經(jīng)NSE免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定海馬神經(jīng)元的純度。將培養(yǎng)好的海馬神經(jīng)元隨機(jī)分為低劑量

3、組、中劑量組、高劑量組和對(duì)照組，在培養(yǎng)液中加入無水乙醇，使培養(yǎng)液中乙醇的終濃度分別為11mM，33mM，66mM，對(duì)照組在培養(yǎng)液中加入等量生理鹽水，在二氧化碳培養(yǎng)箱共同培養(yǎng)1h、12h、24h。然后通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察不同濃度不同作用時(shí)間干預(yù)下海馬神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化，用CCK-8試劑盒檢測(cè)海馬神經(jīng)元活性的變化。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度不同作用時(shí)間乙醇干預(yù)下海馬神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化：低劑量組加入11mM乙醇，各時(shí)間段細(xì)

4、胞形態(tài)未發(fā)生明顯改變，胞漿和突起著色的深淺未發(fā)生明顯變化，神經(jīng)元的特征與正常對(duì)照組基本相同。中劑量組加入33mM乙醇，作用1h后極個(gè)別細(xì)胞的邊緣變得模糊不清，細(xì)胞未出現(xiàn)明顯的聚集現(xiàn)象，細(xì)胞突起數(shù)量減少不明顯。作用12h后細(xì)胞開始出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，呈簇狀，可見神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞開始增殖。作用24h后可見細(xì)胞密度明顯降低，細(xì)胞之間的突觸連接減少，每個(gè)細(xì)胞的突起數(shù)量減少，但仍可見稀疏的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。高劑量組加入66mM乙醇，作用1h后細(xì)胞的突起長(zhǎng)度變短，突

5、起數(shù)量變少。作用12h后細(xì)胞簇狀聚集現(xiàn)象明顯，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增殖大量增殖。作用24h后細(xì)胞大量死亡，細(xì)胞密度極低，細(xì)胞的突起變短，細(xì)胞間的突觸連接極少，幾乎不能形成神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。
　　2.不同濃度不同作用時(shí)間乙醇干預(yù)下海馬神經(jīng)元的活性變化：不同濃度乙醇對(duì)海馬神經(jīng)元細(xì)胞活性的影響與對(duì)照組相比有明顯的變化，細(xì)胞活性在不同作用時(shí)間均有下降，活性改變的程度與乙醇作用濃度呈劑量依賴關(guān)系，尤其是高濃度組對(duì)海馬神經(jīng)元活性的改變更為明顯。相同濃度乙醇在

6、不同的作用時(shí)間對(duì)海馬神經(jīng)元的活性的影響與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.采用陰道涂片法和循環(huán)交配法相結(jié)合的方法，成功獲取精確妊娠孕鼠和P0期乳鼠，簡(jiǎn)化動(dòng)物繁殖過程，保證實(shí)驗(yàn)中乳鼠的供給。
　　2.中、高劑量的乙醇會(huì)造成原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元的胞體損傷，細(xì)胞間的突觸連接減少，突起長(zhǎng)度變短，突起數(shù)量減少，且與作用時(shí)間相關(guān)聯(lián)。
　　3.不同濃度的乙醇能夠引起原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元活性的降低，與乙醇濃度