異丙酚對(duì)原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元線粒體膜電位的影響.pdf

1、目的：本研究擬觀察臨床相關(guān)濃度的異丙酚對(duì)缺氧復(fù)氧損傷后大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)、MTT及線粒體膜電位的變化，進(jìn)一步探討異丙酚對(duì)腦再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。從而指導(dǎo)臨床合理用藥，為異丙酚在臨床上的進(jìn)一步應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：1.孕17～18天的胎鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)；2.實(shí)驗(yàn)分組：將培養(yǎng)6-7天的胎鼠海馬細(xì)胞分為正常對(duì)照組(C)，缺氧復(fù)氧模型(M)組和異丙酚(P)組；后兩組分別于復(fù)氧0h，4h，8h，12h，24h小時(shí)取樣進(jìn)行試驗(yàn)

2、(各時(shí)間點(diǎn)分別標(biāo)記為T1，T2，T3，T4，T5)。3.倒置相差顯微鏡下觀察各組各時(shí)間點(diǎn)海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)的變化。4.采用MTT法評(píng)價(jià)異丙酚對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元存活率和線粒體功能的影響。5。以Rh123為熒光探針標(biāo)記大鼠海馬神經(jīng)元線粒體，用流式細(xì)胞儀對(duì)線粒體膜電位(MMP)進(jìn)行定量分析，激光共聚焦顯微鏡對(duì)線粒體膜電位進(jìn)行定性觀察。 結(jié)果：1.原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元，形態(tài)活性良好。2.模型組神經(jīng)元胞體內(nèi)出現(xiàn)空泡，軸突斷裂，出現(xiàn)碎片。異丙

3、酚組神經(jīng)元輕微腫脹，個(gè)別神經(jīng)元胞體內(nèi)出現(xiàn)空泡，受損傷細(xì)胞比例較模型組低。3.MTT法顯示：在復(fù)氧0-12小時(shí)中的各時(shí)間點(diǎn)異丙酚組細(xì)胞存活率均顯著大于模型組(P<0.05)，而在復(fù)氧24小時(shí)，模型組和異丙酚組的細(xì)胞存活率已無(wú)顯著性差異。4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示：正常培養(yǎng)組的平均熒光強(qiáng)度值為353.84，缺氧2小時(shí)后兩組的平均熒光強(qiáng)度值都有了明顯下降，模型組為224.09，異丙酚組為264.60。異丙酚組明顯高于模型組。復(fù)氧4-24小時(shí)各

4、時(shí)間點(diǎn)兩組海馬神經(jīng)元線粒體膜電位的平均熒光強(qiáng)度值均勻下降，但同一時(shí)間點(diǎn)的異丙酚組均明顯高于模型組。激光共聚焦顯微鏡掃描結(jié)果顯示：模型組復(fù)氧各時(shí)間段的神經(jīng)元，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，綠色熒光逐漸變暗，數(shù)量減少，紅染細(xì)胞逐漸增多。尤其是復(fù)氧0小時(shí)，和復(fù)氧24小時(shí)的圖像變化最為明顯。而在異丙酚組這種變化較為緩和。 結(jié)論：1.細(xì)胞凋亡線粒體膜電位的變化早在缺氧2h即出現(xiàn)變化，因而可作為細(xì)胞凋亡的早期檢測(cè)指標(biāo)。2.異丙酚能夠增加海馬神經(jīng)元缺血再灌