阿司匹林對(duì)原代培養(yǎng)大鼠AEC-Ⅱ保護(hù)性研究.pdf

1、目的：觀察阿司匹林對(duì)原代培養(yǎng)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（Alveolar epithelialtypeⅡ cell，AEC-Ⅱ）的保護(hù)效應(yīng)，探討其抗氧化損傷的作用機(jī)制。
　　 方法：分離純化大鼠AEC-Ⅱ并離體培養(yǎng)40h，過氧化氫（H2O2）處理建立氧化損傷模型。第一階段觀察阿司匹林對(duì)AEC-Ⅱ的保護(hù)效應(yīng)，隨機(jī)分為五組：C組（正常對(duì)照組），S組（損傷組，加入0.5mmol/LH2O2），A1～3組（阿司匹林預(yù)處理組，分別加入阿司匹林A

2、1組50μmol/L、A2組100μmol/L、A3組200μmol/L預(yù)處理，培養(yǎng)40h后加入0.5mmol/LH2O2）。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，四甲基偶氮唑鹽酶反應(yīng)比色法（MTT法）檢測(cè)細(xì)胞存活率。第二階段觀察阿司匹林對(duì)原代培養(yǎng)AEC-Ⅱ中血紅素加氧酶-1（Heme oxygenase-1，HO-1）表達(dá)的影響，隨機(jī)分為四組：C組（正常對(duì)照組，直接分離純化及原代培養(yǎng)）；A1組（50μmol/L阿司匹林預(yù)處理），A2組（100

3、μmol/L阿司匹林預(yù)處理）：A3組（200μmol/L阿司匹林預(yù)處理）。培養(yǎng)20h、40h、60h免疫組化染色測(cè)定HO-1蛋白表達(dá)量，PCR技術(shù)測(cè)定HO-1 mRNA表達(dá)量。
　　 結(jié)果：（1）胰蛋白酶消化、免疫粘附法可收獲AEC-Ⅱ2～2.5×107個(gè)/鼠，純度和活性>90％。（2）與C組比較，S組細(xì)胞間隙增寬，貼壁細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞皺縮，細(xì)胞存活率明顯下降；與S組比較，A1～3組貼壁細(xì)胞數(shù)增多，細(xì)胞形態(tài)較完整，無明顯細(xì)胞皺

4、縮，A1～3組中細(xì)胞存活率明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（3）與C組比較，A1～3組HO-1蛋白及HO-1mRNA表達(dá)量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 結(jié)論：（1）胰蛋白酶消化、免疫粘附法能夠獲得滿意的細(xì)胞產(chǎn)量、純度和活性。（2）阿司匹林對(duì)離體培養(yǎng)大鼠AEC-Ⅱ氧化損傷具有保護(hù)效應(yīng)。（3）阿司匹林在離體培養(yǎng)的大鼠AEC-Ⅱ有上調(diào)HO-1表達(dá)的作用。HO-1可能是阿司匹林對(duì)離體培養(yǎng)大鼠AEC-Ⅱ氧