心鈉素及其受體在原代培養(yǎng)大鼠耳蝸血管紋邊緣細胞的表達及其意義.pdf

1、目的：
　　研究心鈉素(atrial natriuretic peptide，ANP)及其受體(natriuretic peptide receptor，NPR)在原代培養(yǎng)的大鼠耳蝸血管紋(stria vascularis，VS)邊緣細胞（marginal cell，MC）是否表達，并探討其意義。
　　方法：
　　利用新生1－3天SD大鼠的耳蝸血管紋組織作MC體外原代培養(yǎng)，用倒置顯微鏡觀察原代培養(yǎng)的MC的細胞形態(tài)，排列

2、方式，生長方式，用選擇性消化法純化MC，用免疫細胞化學方法檢測MC中細胞角蛋白－18（CK-18）表達情況，鑒定所培養(yǎng)細胞是否為MC。
　　用免疫細胞化學方法檢測原代培養(yǎng)MC中ANP及NPR-A表達情況。應用RT-PCR方法檢測原代培養(yǎng)的MC中是否具有編碼ANP及其受體NPRs的mRNA存在。
　　結(jié)果：
　　細胞培養(yǎng)：
　　利用新生1－3天SD大鼠的耳蝸血管紋組織培養(yǎng)出MC，培養(yǎng)細胞CK18表達陽性，表明所培養(yǎng)

3、細胞為上皮來源的血管紋邊緣細胞。掃描電鏡觀察：原代培養(yǎng)的MC成扁平多角的外觀，表面有許多微絨毛，并可見分泌囊泡，也可見囊泡排出后的“洞口樣”結(jié)構。
　　ANP免疫反應顆粒在MC中的表達：
　　原代培養(yǎng)3天的MC中可見到大量棕褐色心鈉素反應陽性顆粒，以細胞核周圍和核兩極處為多，也可見分散或成團的顆粒，位于胞漿中，離核越遠顆粒越少，有少數(shù)顆粒呈彌散分布和細胞膜下分布。
　　NPR-A免疫反應顆粒在MC中的表達：
　　

4、原代培養(yǎng)3天的MC細胞膜可見到大量棕褐色NPR-A反應陽性顆粒，圍繞細胞呈環(huán)狀，胞膜游離面無NPR-A陽性反應顆粒。
　　ANP及NPRmRNA的表達情況：培養(yǎng)2周的MC提取的RNA擴增出ANP及NPR目的條帶，用凝膠成像及定量掃描儀測得ANP片段大小269bp(圖10)，NPR-A片段大小454bp，NPR-B片段大小408bp，NPR-C片段大小208bp，為目的基因片段。
　　結(jié)論：
　　本實驗結(jié)果表明MC具有合