原代培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細胞液壓沖擊損傷蛋白質(zhì)表達譜的變化及意義.pdf

1、目的：研究液壓沖擊損傷大鼠星形膠質(zhì)細胞蛋白質(zhì)表達譜，探尋腦損傷生物標志蛋白。 方法：選用出生后24h內(nèi)SD大鼠，取大腦皮質(zhì)于DMEM-F12培養(yǎng)基中進行星形膠質(zhì)細胞體外分離培養(yǎng)和純化，并以膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫細胞化學(xué)染色進行鑒定。隨機分為對照組和損傷后4h、8h、12h、24h、48h組，復(fù)制重度液壓沖擊損傷模型。臺盼藍染色和PI/Hoechst3342染色觀察星形膠質(zhì)細胞損傷后時序性變化；采用弱陽離子交換芯片(WC

2、X-2)和強陰離子交換芯片(SAX2)結(jié)合表面增強激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)分析大鼠星形膠質(zhì)細胞液壓沖擊損傷后不同時間蛋白質(zhì)表達譜的改變。 結(jié)果： 1.星形膠質(zhì)細胞的原代培養(yǎng)及純化純化傳代后，星形膠質(zhì)細胞形態(tài)單一，胞體較大而扁、胞質(zhì)較豐富、形狀不規(guī)則；胞突豐富、分支多呈放射狀，一級胞突較粗，常有二級分支；胞核圓形或橢圓形，常偏于胞體一側(cè)。 2.星形膠質(zhì)細胞的鑒定經(jīng) GFAP 免疫細胞化學(xué)染色(SP法)及免疫熒光

3、染色鑒定，陽性細胞計數(shù)，星形膠質(zhì)細胞可達95％以上。 3.液壓沖擊損傷后星形膠質(zhì)細胞形態(tài)學(xué)變化0.2MPa沖擊壓力下，細胞明顯腫脹，細胞間隙增大，有少量脫壁，死亡細胞數(shù)增多；沖擊壓力達0.8MPa時，大片細胞壞死，失去正常細胞結(jié)構(gòu)，細胞連接斷開，成片狀脫壁，有些區(qū)域只剩下零星單個細胞。PI/Hoechst3342染色可觀察到凋亡細胞。 4.蛋白質(zhì)芯片檢測。 結(jié)論： 1.液壓沖擊損傷可引起皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞