脂肪干細胞原代培養(yǎng)及成肌誘導的實驗研究.pdf

1、目的：探討大鼠脂肪干細胞（adipose derived stem cells，ADSCs）的分離、培養(yǎng)及成肌誘導，為成肌細胞尿道括約肌注射治療壓力性尿失禁探索新的種子細胞。 方法：取SD大鼠腹股溝處脂肪，機械剪碎后通過酶消化法分離、培養(yǎng)得到脂肪干細胞。通過對脂肪干細胞相關抗原CD90、CD105和造血干細胞相關抗原CD34的檢測，證明其干細胞特性。取培養(yǎng)至第2代，處于對數生長期的細胞進行成肌誘導實驗。實驗分成誘導組和對照組，分

2、別用誘導培養(yǎng)液和基礎培養(yǎng)液進行培養(yǎng)。誘導培養(yǎng)液為含10μmol/L 5-氮雜胞苷（5-azacytidine，5-Aza）、5％FBS（胎牛血清）和5％馬血清的DMEM培養(yǎng)液，而對照組所用的基礎培養(yǎng)液為只含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液。實驗期間誘導組和對照組給予相同的處理。誘導時間分為7天、14天、21天、28天和35天，誘導期間通過倒置相差顯微鏡觀察細胞的生長情況和形態(tài)變化。誘導結束后通過免疫熒光和流式細胞儀檢測成肌細胞特異性抗原結蛋

3、白（Desmin）和肌球蛋白（Myosin）的表達情況，檢測誘導結果。 結果：通過酶消化法可以從大鼠腹股溝脂肪中分離、培養(yǎng)出ADSCs。相關的CD分子檢測證明其具有干細胞特性。對培養(yǎng)至第2代的ADSCs，使用含10μmol/L 5-Aza的誘導培養(yǎng)液進行成肌誘導培養(yǎng)，28天后細胞整體表現(xiàn)出成肌細胞特有的“漩渦”樣生長形態(tài)，單個細胞表現(xiàn)出多核化。免疫熒光和流式細胞儀檢測結果顯示Desmin和Myosin的表達率在誘導28天時達最高