人腦星形細(xì)胞瘤的原代培養(yǎng)及其侵襲性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、拌矛 獸 件 作 母- 這 。 “ 59芋 虧 或 甲 請 號 盯 3 120 08密 級 公 開文學(xué) 論 大 位 州 學(xué) 鄭 士碩論 文 題 目: 人腦星 形 細(xì)胞瘤 的原代 培養(yǎng)及其 侵 襲 性 的實(shí)驗(yàn)研 究作 者學(xué) 科姓 名 :門 類 :孫 力 超醫(yī) 學(xué)專 業(yè) 名 稱 :導(dǎo)師 姓 名 、職稱 :病 理 學(xué) 與病 理 生 理 學(xué)孔令 非 主任 醫(yī)師二零 零 八 年 五 月鄭州大學(xué) 2008 年碩士畢業(yè)論文 摘 要驗(yàn) 依 據(jù) 。材 料

2、 和 方 法1. 取新鮮 手術(shù)標(biāo) 本 并做 常規(guī)病 理檢 查本 實(shí)驗(yàn)取星形細(xì)胞瘤手術(shù)后 的新鮮 離體標(biāo)本 ， 一部分送 常規(guī)病理檢查 ， 剩余大 小約 IcmxIcm xIcm 的組織無菌包裹 ，送入無菌培養(yǎng) 間培養(yǎng) 。對用常規(guī)病理檢 查 (H E 及 免疫 組化 ) 證 明為星 形細(xì) 胞瘤 的標(biāo)本 繼續(xù)培 養(yǎng) 。2. 星 形 細(xì) 胞瘤 標(biāo)本 的處理應(yīng) 用機(jī)械 分 散法 分離細(xì)胞 。 用剪 刀將瘤 組織剪成碎塊 ，并將組 織碎 塊放 在

3、注射 器 內(nèi)反 復(fù)推 壓 后取 出，胰 蛋 白酶 消化 后制 成細(xì)胞懸液 。鏡 檢細(xì) 胞 計 數(shù) 、接 種 培養(yǎng) 。3. 星 形 細(xì)胞 瘤 原代 培養(yǎng)用上述分離方法得到的細(xì)胞，細(xì)胞懸液計數(shù) 1x100/ m l后，在 PR M n 640 培養(yǎng)基 (加 10 % 胎 牛血清 )、37 ℃ 、5 % C O Z條件下 、培養(yǎng)板 中培養(yǎng) ，每 隔 3一 4d 換培養(yǎng)液 1 次 ; 細(xì) 胞長滿底 部 70% 一 80% 后 ，用 0.25 %

4、 胰 蛋 白酶 消化 ，細(xì)胞 計數(shù) ，傳 代 。繼 續(xù) 培 養(yǎng) ，對細(xì) 胞 進(jìn) 行 形 態(tài) 學(xué) 觀 察 、免 疫 細(xì)胞 化 學(xué)鑒 定和 B oy dencham be r侵 襲 小室 實(shí)驗(yàn) 。4. 細(xì)胞 形 態(tài) 學(xué)觀 察用 倒 置相 差 顯微鏡 觀 察 活 細(xì)胞 的形態(tài) 學(xué)和 生長狀態(tài) 的變 化 ， 觀 察 不 同級別 的星 形 細(xì) 胞 瘤 形 態(tài) 學(xué)和 生 長 狀 態(tài) 的不 同 。5. 免 疫 細(xì) 胞 化 學(xué)鑒 定采 用 sP 法 ，

5、檢測膠 質(zhì) 纖 維酸性 蛋 白 (o E A p )、IV型膠 原 (e ol l agen w ) 和巢 蛋 白(nest in)在 原代培養(yǎng) 細(xì)胞 中的表達(dá) 。6.B oydencham ber 實(shí)驗(yàn)B oy den 小室測定原代 培養(yǎng) 的m 級 、W 級星形 細(xì)胞瘤細(xì) 胞 ，在 相 同 的培養(yǎng) 時間和 培 養(yǎng) 條件 下 的趨 化 性 和 侵 襲 能 力 ， 觀 察 兩 種 級 別 的腫瘤 細(xì) 胞 趨 化 性 和 侵 襲 力的 差