含SV40Tag成神經(jīng)管細胞瘤細胞原代培養(yǎng)及移植瘤模型建立的研究.pdf

1、成神經(jīng)管細胞瘤是一種小腦神經(jīng)外胚層腫瘤，是最常見的兒童中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，發(fā)病率約占兒童腦腫瘤的25％，死亡率排在腫瘤疾病之首。SimianVirus40(SV40)屬于多瘤病毒(polyomavirus)屬，其早期基因編碼產(chǎn)物大T抗原(SV40Tag)具有致癌性。流行病學發(fā)現(xiàn)在人的腦腫瘤組織中能檢測到SV40病毒基因組序列。目前對SV40在腫瘤發(fā)生過程中所扮演的具體角色和確切機制還不十分清楚。本實驗室已經(jīng)成功構建了pTet-on、pTR

2、E2-SV40Tag轉基因小鼠腦腫瘤模型，并對該模型的腫瘤類型進行鑒定，證實為小鼠成神經(jīng)管細胞瘤。 本研究中，我們對轉基因鼠的成神經(jīng)管細胞瘤進行了腫瘤細胞的原代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)后，再進行克隆化培養(yǎng)，以建成穩(wěn)定的細胞系。選擇臨床常用的幾種抗癌藥，利用細胞培養(yǎng)法進行體外抗腫瘤藥物的篩選，通過MTT法檢測，結果顯示絲裂霉素對其有一定的抑制效應。 利用培養(yǎng)的腫瘤細胞，皮下移植裸鼠，并成功發(fā)瘤。取腫瘤組織切片，進行組織病理學分析，并

3、與轉基因鼠的腦腫瘤組織比較，結果顯示腫瘤組織形態(tài)未發(fā)生改變。提取其RNA，經(jīng)RT-PCR能檢測到目的片段；采用免疫組化和WesternBlotting進一步驗證，結果表明腫瘤組織仍表達SV40Tag。 綜上，本研究對pTet-on、pTRE2-SV40Tag轉基因小鼠成神經(jīng)管細胞瘤模型，進行了腫瘤細胞的原代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)后建成穩(wěn)定的細胞系，為SV40Tag的后續(xù)研究奠定了良好的基礎。利用腫瘤細胞皮下移植裸鼠，成功建立裸鼠成神經(jīng)管