醋酸棉酚對(duì)豬原代培養(yǎng)黃體細(xì)胞凋亡影響的研究.pdf

1、我國是一個(gè)產(chǎn)棉大國，棉籽餅粕資源豐富，營養(yǎng)價(jià)值高，且價(jià)格低廉，日益成為飼料中植物蛋白的重要來源。但棉酚是棉籽餅粕中的主要有毒成分，棉酚的雄性抗生育作用早已被證實(shí)，而棉酚對(duì)雌性的繁殖毒性作用研究較少，觀點(diǎn)不一。為探討棉酚對(duì)母畜的繁殖毒性作用，合理開發(fā)利用棉籽餅粕作為畜禽配合飼料，進(jìn)行了本試驗(yàn)。 試驗(yàn)采用長大雜母豬原代培養(yǎng)黃體細(xì)胞為模型，通過MTT法、DNALadder檢測(cè)和TUNEL法，初步探討0、0.4、2、10、50μg/mL

2、醋酸棉酚對(duì)豬原代培養(yǎng)黃體細(xì)胞的凋亡影響以及毒性作用。用機(jī)械分離和0.2﹪膠原酶Ⅱ消化相結(jié)合的方法分離黃體細(xì)胞，0.4﹪臺(tái)盼蘭拒染試驗(yàn)顯示其活率在90﹪以上。豬原代培養(yǎng)黃體細(xì)胞生長良好，預(yù)培養(yǎng)24h進(jìn)行試驗(yàn)，滿足試驗(yàn)要求。MTT檢測(cè)結(jié)果表明：5﹪乙醇溶劑對(duì)照組與0μg/mL組比較，無差異性(P＞0.05)，說明5﹪乙醇對(duì)豬原代培養(yǎng)黃體細(xì)胞的影響可以忽略。處理24h，0.4μg/mL濃度組與溶劑對(duì)照組比較，差異顯著(P＜0.05)，其它各濃

3、度組差異極顯著(P＜0.01)；處理48h，各濃度組與溶劑對(duì)照組比較，差異均極顯著。兩時(shí)間段同水平間比較，10μg/mL和50μg/mL組差異極顯著；48h兩濃度組黃體細(xì)胞抑制率分別達(dá)60﹪和70﹪。瓊脂糖凝膠電泳各組均未檢測(cè)到DNALadder。TUNEL檢測(cè)結(jié)果表明：各劑量組均有黃體細(xì)胞凋亡，凋亡率5﹪～23﹪，隨著醋酸棉酚濃度的增加細(xì)胞凋亡率也增加。24h和48h各劑量組與溶劑對(duì)照組相比，差異均極顯著。兩時(shí)間段同水平間比較，0.4

4、μg/mL和2μg/mL組無差異性；10μg/mL和50μg/mL組差異極顯著。豬原代培養(yǎng)黃體細(xì)胞試驗(yàn)?zāi)Ｐ偷某晒?yīng)用，為體外研究黃體的相關(guān)試驗(yàn)提供了方法借鑒。醋酸棉酚在低、高劑量下均能抑制豬原代培養(yǎng)黃體細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)其凋亡。低劑量下主要通過誘導(dǎo)黃體細(xì)胞凋亡，從而抑制細(xì)胞增殖；高劑量下除誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡外，主要對(duì)細(xì)胞直接造成損傷，產(chǎn)生細(xì)胞毒性。這種作用呈劑量相關(guān)性；在一定劑量下，有時(shí)間依賴關(guān)系。鑒于棉酚在低劑量時(shí)能誘導(dǎo)黃體細(xì)胞凋亡，影響母畜