淡水魚類細胞現(xiàn)采現(xiàn)培技術(shù)的初步建立與關(guān)鍵技術(shù)點研究.pdf

1、依據(jù)患病魚體的組織細胞就是該疾病病原體的敏感細胞這一原則,探索一種“現(xiàn)采現(xiàn)培”的細胞培養(yǎng)法,即采集與患病魚同種類的健康魚組織細胞進行培養(yǎng)。
　　 本課題從實驗室布局建設(shè)開始進行,以草魚(Ctenopharyngodonidellus)和胡子鯰(clarias.fuscus)的腎臟、吻端組織為實驗對象,同時,外購細胞系——CO作為細胞培養(yǎng)對照組。試驗結(jié)果表明:外購細胞系,經(jīng)胰酶消化,傳代后細胞可貼壁且生長狀態(tài)良好,現(xiàn)已成功傳至16

2、代;試驗對象采用胰酶消化和組織塊法獲得原代細胞,兩種方法均可獲得大量單一、分散的細胞,將所得的細胞通過臺盼藍染色,倒置顯微鏡下觀察,計算后細胞存活率可高達92％以上,但按胰酶消化后,通過6個方案進行培養(yǎng)條件的篩選與優(yōu)化后,細胞仍未能貼壁;組織塊法所得細胞可進行貼壁培養(yǎng),由于組織塊附近的遷移細胞過于密集,發(fā)生接觸抑制,造成部分細胞狀態(tài)不良,最終細胞胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡以及顆粒狀物質(zhì),細胞之間空隙增大,裂解為碎片。經(jīng)吹打傳代后,進行接種,細胞難以