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1、蓖麻(Ricinus communis L)是特殊的油料作物,矮稈蓖麻在單產(chǎn)較高、適合密植和機(jī)械化生產(chǎn)等方面具有顯著優(yōu)勢(shì)。鋅指蛋白是植物特有的一類轉(zhuǎn)錄因子,種類較多,Dof蛋白含有特異的單鋅指DNA結(jié)合域,在植物生長(zhǎng)發(fā)育中起重要作用,參與調(diào)控植株矮化。本試驗(yàn)克隆RcDof基因,利用原核表達(dá)系統(tǒng)對(duì)該基因進(jìn)行原核表達(dá)和純化,建立RcDof(44-101)表達(dá)純化體系,獲得大量高純度的融合蛋白,篩選結(jié)晶條件,為RcDof結(jié)構(gòu)與功能的研究及Rc
2、Dof在植物中的作用分子機(jī)制研究提供一定的理論與試驗(yàn)依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果如下:
1.構(gòu)建pETM-20-RcDof,pETM-30-RcDof,pETM-40-RcDof,pETM-50-RcDof和pETMBP-XE-RcDof(132-303)的原核表達(dá)載體。
2.將表達(dá)載體轉(zhuǎn)入BL21(DE3)表達(dá)菌株中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),pETM-20-RcDof,pETM-30-RcDof,pETM-40-RcDof,pETM-50-
3、RcDof所表達(dá)的蛋白均以包涵體的形式存在。嘗試對(duì)包涵體進(jìn)行了變復(fù)性純化,但純化結(jié)果無法滿足后續(xù)試驗(yàn)要求,尿素濃度降低后,蛋白不可溶。pETMBP-XE-RcDof(132-303)以可溶的形式存在。
3.對(duì)RcDof(44-101)蛋白進(jìn)行His親和純化,離子交換和分子篩層析純化,得到高純度的融合蛋白。
4.對(duì)RcDof(44-101)蛋白結(jié)晶條件進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)其在0.2M Ammonium,0.1M BIS-TR
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