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1、蜱類體內(nèi)的抗凝血酶對蜱在生長發(fā)育過程中的吸血和血餐消化發(fā)揮著重要的作用。本研究通過對森林革蜱(Dermacentor silvarum)cDNA文庫的篩選,克隆得到了一條符合抗凝血酶特征的基因序列,命名為DS-AT。該序列全長616bp,開放閱讀框為429bp,編碼142個氨基酸。經(jīng)信號肽在線預(yù)測分析,信號肽有16個氨基酸,成熟肽有126個氨基酸。功能結(jié)構(gòu)域分析顯示DS-AT包含兩個BPTI-like結(jié)構(gòu)域,屬于Kunitz家族。經(jīng)NC
2、BI Blast檢索發(fā)現(xiàn)森林革蜱抗凝血酶基因編碼蛋白與boophilin蛋白的同源性是89%,以boophilin抗凝血酶氨基酸序列為模板,構(gòu)建了DS-AT蛋白的三級結(jié)構(gòu)模型。各組織和發(fā)育各階段熒光定量分析表明,DS-AT主要在雌蜱和雄蜱中腸和唾液腺中表達,在若蜱、雌蜱和雄蜱中均有表達。通過原核表達,獲得了DS—AT重組蛋白,其分子量約為36 KDa,并對該重組蛋白進行了抗凝血活性以及抑菌活性的檢測,結(jié)果表明DS-AT重組蛋白具有抑制凝
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